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Spike-ACE2依賴性細胞融合

2021-11-24
瀏覽次數(shù): 264

InvivoGen開發(fā)了一種細胞檢測方法以模擬SARS-CoV-2誘導(dǎo)的合胞體(syncytia)。合胞體是在患有嚴重COVID-19患者的肺部觀察到的現(xiàn)象。這套工具透過簡單的定量和比色測定法,助您研究Spike-ACE2依賴性細胞融合(cell fusion)。


此測定是依賴轉(zhuǎn)接分子MyD88從'供體細胞'轉(zhuǎn)移到表達了NF-κB誘導(dǎo)性SEAP報告基因'受體細胞'來讀數(shù)。

?“供體”細胞:293-hMyD88細胞(轉(zhuǎn)染pUNO1-Spike質(zhì)粒后共表達Spike變異株)

?“受體”細胞:HEK-Blue??hACE2A549-Dual??hACE2-TMPRSS2細胞


共培養(yǎng)“供體”和'受體'細胞會驅(qū)動它們的細胞膜發(fā)生Spike-ACE2依賴性融合。在'供體'細胞中過表達的MyD88會激活信號級聯(lián)反應(yīng),導(dǎo)致受體細胞產(chǎn)生NF-κB誘導(dǎo)性SEAP。SEAP的活性可使用檢測試劑QUANTI-Blue?溶液進行測量。


抗體的中和能力可以用SEAP分泌量的減少來評估。如圖所示,

Anti-CoV2RBD-imd-mIgG2a阻斷了原始病毒株和P.1變異株的細胞融合,而Anti-CoV2RBD-cas-mIgG2a對相同的P.1變異株的抑制作用較弱。

Spike-ACE2依賴性細胞融合?

Fig: Cell fusion inhibition assay.?293-hMyD88 cells were transfected with either the pUNO1-Spike or pUNO1-SpikeV5 plasmid and then incubated with Anti-CoV2RBD-cas-mIgG2a, Anti-CoV2RBD-imd-mIgG2a, or Anti-βGal antibodies. These cells were then co-cultured with HEK-Blue? hACE2 cells. After overnight incubation, cell fusion was assessed by measuring the activity of SEAP in the supernatant using QUANTI-Blue? Solution.


相關(guān)產(chǎn)品信息

貨號

名稱

規(guī)格

293-hmyd

293-hMyD88 Cells

3 -7 x 106?cells

hkb-hace2

HEK-BlueTM?hACE2 Cells

3 -7 x 106?cells

a549d-cov2r

A549-DualTM?hACE2-TMPRSS2 Cells

3 -7 x 106?cells

p1-spike-v’x’-df

pUNO1-SpikeV’X’-dfur

20 μg

p1-spike-v’x’

pUNO1-SpikeV’X’

20 μg

備注:dfur表示inactivated furin site


“x”指 Spike變異株的內(nèi)部編號,詳見下表表格


InvivoGen

PANGO

WHO

Original

(D614)

-

V1

(G614)

-

V2

B.1.1.7

Alpha

V3

B.1.351

Beta

V4

B.1.429

Epsilon

V5

P.1

Gamma

V6

B.1.526

Iota

V7

B.1.617.1

Kappa

V8

B.1.617.2

Delta

V9

C.37

Lambda

V10

B.1.621

Mu




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