根據(jù)下列的酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）故障排除指南來快速找出問題原因，改善您的實驗步驟和解決方案。

　　首先從下面幾個情況中找到您的ELISA的問題所在:?

-標(biāo)準(zhǔn)曲線有問題?

　　變異系數(shù) (CV)高

　　高背景

　　樣品讀數(shù)過高

　　樣品讀數(shù)過低

　　注意: 如果使用的是StressXpress? ELISA 檢測試劑盒，請參照 StressXpress? ELISA 的故障排除指南。如果使用的是自己制作的ELISA試劑盒，請參考其他的ELISA試劑盒故障排除指南。

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線有問題

　　標(biāo)準(zhǔn)品制備不當(dāng):

　　StressXpress? – 確保正確計算和實施了標(biāo)準(zhǔn)品稀釋度

　　StressXpress? – 在打開標(biāo)準(zhǔn)品之前要離心

　　如果標(biāo)準(zhǔn)品是凍干粉，在稀釋之前確保所有的成分都已經(jīng)溶解

　　使用精準(zhǔn)的移液器，并確保操作正確

　　標(biāo)準(zhǔn)品降解了:

　　StressXpress? – 確保標(biāo)準(zhǔn)品按照指示保存，以避免降解發(fā)生

　　使用新鮮的標(biāo)準(zhǔn)品

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線不擬合:

　　使用不同的標(biāo)度或者曲線擬合

　　移液錯誤:

　　確保多道移液器是校準(zhǔn)好的

-變異系數(shù) (CV)高

　　酶標(biāo)板孔底部攪亂:

　　移液時避免接觸孔板底部。將移液器吸頭對準(zhǔn)孔壁，避免攪亂孔底區(qū)域。

　　孔中加試劑量不對:

　　StressXpress? – 根據(jù)說明書上的要求對每個孔加一定量的試劑

　　如果使用自動清洗系統(tǒng)，確保每個端口干凈無阻礙。

　　邊緣效應(yīng):

　　確保整個孔板溫度一致，并且試劑都是室溫。

　　移液錯誤:

　　保證多道移液器是校準(zhǔn)好的

　　清洗錯誤:

　　確保每次洗板前徹底移除所有孔中的緩沖液

　　樣品不均一:

　　使用前將樣品和試劑充分混合確保均一性

　　如果必要，將溶液中顆粒離心出來

　　振蕩混合不充分:

　　確保在所有的孵育步驟時將酶標(biāo)板放到振蕩器上

　　孔間污染:

　　避免使移液器吸頭與孔壁或孔中的試劑接觸

　　如果每次孵育使用同一個封板膜，確保試劑沒有沾染到封板膜上

-高背景

　　洗滌不充分:

　　StressXpress? – 按照說明書上指示的正確洗滌劑量和次數(shù)洗滌

　　在加底物溶液之前增加洗滌劑量和洗滌次數(shù)

　　樣品蒸發(fā)了:

　　用試劑盒中提供的封板膜或parafilm將酶標(biāo)板緊密覆蓋

　　空白對照有誤:

　　StressXpress? – 按照說明書要求正確混合空白對照的試劑

　　確保其他孔的讀數(shù)都減去了空白對照的讀數(shù)

　　反應(yīng)沒有終止:

　　StressXpress? – 確保每孔加入了正確劑量的終止液

　　使用新鮮的終止液

　　TMB 曝光失效:

　　使用前將TMB保存于遮光小瓶中

　　TMB 污染了:

　　在將TMB加入各孔前確保 TMB 清澈透明

　　空白孔受污染:

　　避免使多道移液器吸頭觸碰到板孔或孔中的試劑

　　酶標(biāo)板底部不潔:

　　徹底清洗酶標(biāo)板底部

-樣品讀數(shù)過高

　　樣品濃度太高:

　　StressXpress? – 按照實驗步驟里指示的稀釋樣品或根據(jù)特殊樣品優(yōu)化稀釋步驟

　　增加樣品稀釋度

　　HRP 濃度錯誤:

　　StressXpress? – 確保按照實驗步驟里指示的稀釋度使用HRP

　　孵育時間太長:

　　StressXpress? – 按照實驗步驟中指示的孵育樣品

　　減少孵育時間

-樣品讀數(shù)過低

　　抗原水平過低:

　　StressXpress? – 按照實驗步驟里指示的稀釋樣品或根據(jù)特殊樣品類型優(yōu)化稀釋步驟

　　降低樣品的稀釋度或者濃縮樣品

　　反應(yīng)時間太短:

　　StressXpress? – 根據(jù)實驗步驟決定最佳反應(yīng)時間

　　適量增加反應(yīng)時間

　　孵育時間太短:

　　StressXpress? – 根據(jù)是實驗步驟里描述的孵育樣品

　　增加孵育時間

　　孵育溫度過低:

　　StressXpress? – 按照實驗步驟中指示的溫度孵育樣品

　　優(yōu)化孵育溫度

　　酶標(biāo)板過期:

　　StressXpress? – 查看試劑盒包裝上的保質(zhì)期

　　包被新的酶標(biāo)板

　　抗體濃度過低:

　　StressXpress? – 使用實驗步驟里指示的抗體濃度

　　增加抗體濃度

　　底物不在室溫:

　　所有試劑使用前都必須保持室溫 (25?C)

　　波長不對:

　　確保酶標(biāo)板讀數(shù)時使用的合適的波長

　　酶標(biāo)板讀數(shù)延遲:

　　加入終止液后應(yīng)立即讀數(shù)，不要延遲

　　樣品類型不適用:

　　StressXpress? – 確保使用的物種和樣品類型是經(jīng)驗證過適用于該試劑盒的

　　洗滌過度:

　　StressXpress? – 根據(jù)實驗步驟使用合適的洗滌量和次數(shù)

　　將洗滌液輕緩移至板孔中

　　如果使用的是洗滌系統(tǒng)，確保壓力合適

　　板孔干透:

　　實驗操作時不要讓板孔干透

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