每個Antibody-Oligonucleotide All-in-One Conjugation Kit提供產(chǎn)生一個寡核苷酸標(biāo)記上抗體結(jié)合物所需的所有試劑。該試劑盒要求用戶提供抗體(多克隆或單克隆哺乳動物IgG，100ug)和HPLC純化的3’或5’氨基修飾寡核苷酸(15–25OD 260?units)。通常合成的1umol就能提供足夠的氨基寡聚物用于修飾。每個試劑盒可以產(chǎn)生20-60ug的高度純化、即用型抗體-寡核苷酸綴合物。產(chǎn)量取決于特異性抗體和寡聚物的大小。最終綴合物濃度通常在0.1-0.3mg/ml之間。

圖1. Antibody-Oligonucleotide All-in-One Conjugation Kit標(biāo)記原理

Antibody-Oligonucleotide All-in-One Conjugation Kit被設(shè)計成在20-60個核苷酸范圍內(nèi)與氨基修飾的寡核苷酸最佳結(jié)合。少于20個核苷酸的寡核苷酸不能與該試劑盒成功結(jié)合；可以使用超過60個堿基的寡聚物，但是共軛產(chǎn)率減少。盡管已報道成功使用了超過60個堿基(最多120個堿基)的寡核苷酸，但我們不建議超過試劑盒優(yōu)化結(jié)合的60個堿基限制。該試劑盒已針對25OD?260units寡核苷酸的修飾進行了優(yōu)化；但是，如果需要，最少可以使用15OD260?units。

適用于這種結(jié)合過程的抗體是哺乳動物抗體。非哺乳動物或非免疫球蛋白型抗體不得用于本試劑盒。請確?？贵w制劑不含載體分子，如明膠或牛血清白蛋白，因為它們會干擾結(jié)合過程。同樣，由于這些溶液的粘度增加，高濃度甘油(> 25%)也不合適。小分子胺如Tris或疊氮化鈉是可以接受的，因為它們在抗體修飾前在脫鹽過程中被除去。

圖2. Antibody-Oligonucleotide All-in-One Conjugation Kit?試劑盒標(biāo)記過程

產(chǎn)品組分：

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