7-AAD?細(xì)胞活性分析試劑盒 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 產(chǎn)品編號: 10009856
Cayman提供的7-AAD細(xì)胞活性分析試劑盒，以7-AAD為熒光探針標(biāo)記死細(xì)胞。7-AAD熒光染料不能進(jìn)入活細(xì)胞但可進(jìn)入受損細(xì)胞或死細(xì)胞，進(jìn)而標(biāo)記其DNA。雖7-AAD熒光強(qiáng)度不如PI，但其最大發(fā)射光波長較長(激發(fā)光波長488nm,?發(fā)射光波長650nm),?與PE或FITC發(fā)射光譜疊加較小。因此，7-AAD非常適用于同時用FITC或PE標(biāo)記檢測細(xì)胞表面分子或胞內(nèi)抗原的實驗。
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?400201 | ?Cell-Based?Assay?7-AAD?Staining?Stock?Solution(1,000X) | ?1?Vials/50ul | ?4℃ |
?400202 | ?7-AAD?Assay?Fixative/Actinomycin?D?Solution | ?1?Vials/50ul | ?4℃ |
?10009322 | ?Cell-Based?Assay?Buffer?Tablet | ?4?Tablets | ?Room?Temperature |
7-AAD/CFSE?細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性檢測試劑盒 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 產(chǎn)品編號:?600120
Cayman提供的7-AAD/CFSE?細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性檢測試劑盒利用CFSE標(biāo)記靶細(xì)胞，7-AAD標(biāo)記死細(xì)胞。通過標(biāo)記可區(qū)分四個細(xì)胞群。該試劑盒可快速簡便的在單細(xì)胞水平檢測免疫細(xì)胞的細(xì)胞毒性效應(yīng)。
?編號 | ?名稱 | ?規(guī)格 | ?保存 |
?400201 | ?Cell-Based?Assay?7-AAD?Staining?Stock?Solution(1,000X) | ?2?Vials/50ul | ?4℃ |
?600121 | ?CFSE?Stock?Solution | ?1?Vials/100ul | ?-20℃ |
?10009322 | ?Cell-Based?Assay?Buffer?Tablet | ?4?Tablets | ?Romm?Temperature |
Annexin?V-FITC凋亡檢測試劑盒 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?產(chǎn)品編號: 600120
細(xì)胞凋亡早期的特點之一就是細(xì)胞膜磷脂的重新分布，?如磷脂酰絲氨酸和磷脂酰乙醇胺從脂雙層的內(nèi)膜外翻，從而暴露于細(xì)胞表面。磷脂酰絲氨酸殘基的外翻，可通過其高親和力的結(jié)合蛋白Annexin?V進(jìn)行檢測。Cayman研發(fā)的Annexin?V凋亡檢測試劑盒利用FITC標(biāo)記的Annexin?V作為探針，檢測凋亡細(xì)胞膜外翻的磷脂酰絲氨酸。
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圖.?星孢菌素（Staurosporine）誘導(dǎo)RAW?264.7細(xì)胞凋亡。
凋亡空泡(Apoptosis?Blebs)檢測試劑盒 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?產(chǎn)品編號: 600120
Cayman開發(fā)的凋亡空泡(Apoptosis?Blebs)檢測試劑盒，?利用一個抗體單鏈可變片段的重組蛋白來進(jìn)行檢測，該抗體偏好性結(jié)合凋亡細(xì)胞膜空泡的自身抗原。該重組蛋白與蛋白A融合，再通過熒光標(biāo)記的兔IgG進(jìn)行檢測。
圖.?A:?凋亡空泡(綠色)；B:?死細(xì)胞(紅色)；C:?凋亡空泡(綠色);?D:?細(xì)胞經(jīng)星孢菌素處理，從凋亡到死細(xì)胞(橙色)自噬/細(xì)胞毒性雙染試劑盒 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 產(chǎn)品編號：?600140
Cayman提供的自噬/細(xì)胞毒性雙染試劑盒是在細(xì)胞水平研究細(xì)胞自噬和細(xì)胞毒性調(diào)控的便捷工具，試劑盒利用甲丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,?MDC)自發(fā)熒光,?標(biāo)記培養(yǎng)細(xì)胞的自噬泡結(jié)構(gòu)。
圖.?他莫昔芬(Tamoxifen)提高HepG2細(xì)胞自噬水平。?A:?HepG2細(xì)胞經(jīng)Vehicle處理,?MDC染色(對照)；B：HepG2細(xì)胞經(jīng)Vehicle處理,?PI染色(對照);?C：HepG2細(xì)胞經(jīng)10uM的Tamoxifen,?MDC染色；D:?HepG2細(xì)胞經(jīng)10uM的Tamoxifen,?PI染色結(jié)果。
Caspase-3熒光檢測試劑盒? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ??產(chǎn)品編號: 10009135
Caspase?(Cysteine-requiring?Aspartate?Protease)是一個在細(xì)胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase?3也稱CPP32，Yama或apopain，有時被寫作caspase-3或caspase3，屬于caspase家族的CED-3亞家族?(CED-3?subfamily)，是細(xì)胞凋亡過程中的一個關(guān)鍵酶。?Caspase?3是哺乳動物細(xì)胞中研究最多的一個caspase酶。?Cayman研發(fā)的此款試劑盒利用Caspase-3催化其特異性底物?N-Ac-DEVD-N’-MC-R110，?產(chǎn)生高強(qiáng)度熒光產(chǎn)物，可在485nm下被激發(fā)，發(fā)射光為535nm。同時，試劑盒也提供有活性的Caspase-3作為陽性對照。
細(xì)胞周期時相?(Cell?Cycle?Phase)?檢測試劑盒 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?產(chǎn)品編號:?10009349
Cayman提供的此款細(xì)胞周期時相檢測試劑盒，可用于研究懸浮細(xì)胞樣本中細(xì)胞周期進(jìn)程的誘導(dǎo)和抑制。實驗中涉及細(xì)胞的固定和破膜處理，可實現(xiàn)在完整細(xì)胞中利用PI對其DNA進(jìn)行染色。
?編號 | ?名稱 | ?規(guī)格 | ?保存 |
?10009957 | ?Propidium?Iodide?Reagent,powder | ?1?vial/1mg | ?4℃ |
?10009322 | ?Cell-Based?Assay?Buffer?Tablet | ?2Tablets | ?Room?Temperature |
?10009959 | ?Rnase?A?Solution | ?1?vial/1ml | ?-20℃ |
?10009960 | ?CellCycle?Phase?Determination?Fixative | ?1?vial/100ml | ?Room?Temperature |
CFSE細(xì)胞分裂檢測試劑盒 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 產(chǎn)品編號: 10009853
CFDA?SE的全稱為羧基二乙酸熒光素琥珀酰亞胺酯(Carboxyfluorescein?diacetate,?succinimidyl?ester)。CFDA?SE可以通透細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶(esterase)催化分解成CFSE，并保留于細(xì)胞內(nèi)。?由于CFDA?SE標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均勻和穩(wěn)定，每分裂一次子代細(xì)胞的熒光會減弱一半，這樣通過流式細(xì)胞儀檢測就可以檢測出沒有分裂的細(xì)胞，分裂一次的細(xì)胞(1/2的熒光強(qiáng)度)，分離兩次的細(xì)胞(1/4的熒光強(qiáng)度)，分裂三次的細(xì)胞(1/8的熒光強(qiáng)度)以及類似的其它分裂次數(shù)的細(xì)胞。在熒光減弱到未染色細(xì)胞的背景信號前，可檢測分裂達(dá)8次的細(xì)胞。
圖.?人外周血淋巴細(xì)胞增殖。A-C:?CFSE標(biāo)記的淋巴細(xì)胞（Day0,?Day3,?Day6）
JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 產(chǎn)品編號: 10009172
JC-1是一種廣泛用于檢測線粒體膜電位(mitochondrial?membrane?potential)??Ψm?的理想熒光探針。JC-1有單體和多聚體兩種存在狀態(tài)，在低濃度時以單體的形式存在，高濃度時以多聚體形式存在，兩者的發(fā)射光譜不同。在健康細(xì)胞中線粒體膜電位較高時，JC-1聚集在線粒體的基質(zhì)(matrix)中，形成聚合物?(J-aggregates)，可以產(chǎn)生紅色熒光；在線粒體膜電位較低時，JC-1不能聚集在線粒體的基質(zhì)中，此時JC-1為單體(monomer)，可以產(chǎn)生綠色熒光。?因此可方便地通過熒光顏色的轉(zhuǎn)變來檢測線粒體膜電位的變化。常用紅綠熒光的相對比例來衡量線粒體去極化的比例。通過JC-1從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變可以很容易地檢測到細(xì)胞膜電位的下降，同時也可用JC-1從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變作為細(xì)胞凋亡早期的一個檢測指標(biāo)。
圖.?星形孢菌素(staurosporine)對Jurkat細(xì)胞線粒體膜電位的影響。A：?未經(jīng)星形孢菌素處理的細(xì)胞大多數(shù)具J-聚合物(紅色)；B:?經(jīng)星形孢菌素處理的細(xì)胞由于線粒體膜低電位，而被染成綠色。
LDH細(xì)胞毒性檢測試劑盒 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 產(chǎn)品編號: 10008882
LDH是一種可溶性的胞漿酶，在細(xì)胞凋亡或壞死導(dǎo)致細(xì)胞膜完整性喪失時，LDH從胞漿釋放至細(xì)胞培養(yǎng)基中。因此，LDH的活性作為細(xì)胞膜完整性的一個檢測指標(biāo)，通常也作為評估化學(xué)物質(zhì)或環(huán)境毒性因子的細(xì)胞毒性的檢測方法。Cayman提供的LDH細(xì)胞毒性檢測試劑盒可用于檢測細(xì)胞培養(yǎng)基中LDH的活性，通過兩步反應(yīng)，產(chǎn)生有色產(chǎn)物-甲臢(formazan),?吸光度490-520nm。
多參數(shù)(Multi-Parameter)凋亡檢測試劑盒 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 產(chǎn)品編號: 600330
Multi?Parameter?Apoptosis?Assay?kit聯(lián)合使用4種不同的試劑，同時檢測多種凋亡事件。該獨特的試劑盒利用FITC-Annexin?V結(jié)合物作為探針檢測質(zhì)膜不對稱性，用TMRE作為探針檢測線粒體膜電位，用7-AAD作為膜通透性/細(xì)胞活力指示劑，再用Hoechst染料展示細(xì)胞核形態(tài)。
圖.?星形孢菌素(staurosporine)誘導(dǎo)Jurkat細(xì)胞凋亡，細(xì)胞核形態(tài)變化、線粒體膜電位降低以及Annexin?V-FITC標(biāo)記的陽性細(xì)胞升高。圖A-C為對照，圖D-F為星形孢菌素處理。Hoechst染色顯示大多數(shù)對照細(xì)胞具有完整的圓形細(xì)胞核(A)，?而星形孢菌素處理的細(xì)胞則大多數(shù)呈濃縮、片段化的細(xì)胞核。TMRE染色顯示大多數(shù)對照細(xì)胞線粒體膜電位未受干擾(B)，?而星形孢菌素處理的細(xì)胞膜電位降低，未被染色。大多數(shù)對照細(xì)胞Annexin?V染色陰性(C)，而處理組細(xì)胞染色大多數(shù)呈陽性，表明細(xì)胞正經(jīng)歷凋亡。
MTT細(xì)胞增殖檢測試劑盒 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?產(chǎn)品編號: 10009365
Cayman提供的MTT細(xì)胞增殖檢測試劑盒可用于在任何體外模型中研究細(xì)胞增殖的誘導(dǎo)和抑制。也可用于篩選參與細(xì)胞周期調(diào)控的候選藥物。在實驗中，MTT被細(xì)胞攝入，經(jīng)胞內(nèi)NAD(P)H-氧化還原酶催化還原為甲臢(formazan)?。該實驗可在3-4個小時內(nèi)完成，無需洗滌步驟。
WST-1細(xì)胞增殖檢測試劑盒 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?產(chǎn)品編號: 10008883
WST-1是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。WST-1是MTT的一種升級替代產(chǎn)品，和MTT或其它MTT類似產(chǎn)品如XTT、MTS等相比有明顯的優(yōu)點。試劑盒也可用于篩選參與細(xì)胞周期調(diào)控的候選藥物。
WST-8細(xì)胞增殖檢測試劑盒 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?產(chǎn)品編號: 10010199
WST-8?(2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)，在電子耦合試劑1-Methoxy?PMS存在的情況下能夠被還原成橙黃色水溶性的formazan。WST-8被細(xì)胞內(nèi)脫氫酶生物還原后生成的formazan能夠溶解在組織培養(yǎng)基中，生成的formazan量與活細(xì)胞數(shù)量成正比。實驗的靈敏度比其它四唑鹽如MTT,?XTT,?MTS或WST?-1高。由于WST-8相當(dāng)穩(wěn)定，并且對細(xì)胞沒有毒性，可直接加入到細(xì)胞樣品中長時間孵育。
XTT細(xì)胞增殖檢測試劑盒 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 產(chǎn)品編號:?10010200
XTT化學(xué)名:2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)?carbonyl]?-2H-tetrazolium?hydroxide，作為線粒體脫氫酶的作用底物，被活細(xì)胞還原成水溶性的橙黃色產(chǎn)物formazan。當(dāng)XTT與電子偶合劑（例如PMS）聯(lián)合應(yīng)用時，其所產(chǎn)生的水溶性的formazan產(chǎn)物的吸光度與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。檢測快速、靈敏度高，甚至可以測定較低細(xì)胞密度，重復(fù)性優(yōu)于MTT。試劑盒也可用于篩選參與細(xì)胞周期調(diào)控的候選藥物。
Perfecta?3D?培養(yǎng)細(xì)胞活力檢測試劑盒 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 產(chǎn)品編號: 600990
Cayman研發(fā)的此款?3D?培養(yǎng)細(xì)胞活力檢測試劑盒是基于3D?Biomatrix公司的細(xì)胞培養(yǎng)平臺。?Perfecta3D?懸滴板是一個新的三維細(xì)胞培養(yǎng)平臺，能夠在多孔板模式中形成大小均勻的球狀體懸滴；這種懸滴是細(xì)胞自組裝形成的球狀細(xì)胞簇，是三維（3D）細(xì)胞培養(yǎng)和篩選中研究的最有利的模型之一。同其他類型的3D支架和水凝膠等方法相比，這種球狀體具有簡單性，可重復(fù)性以及生理組織的相似性，能模擬組織腫瘤固有的代謝（氧氣、二氧化碳、養(yǎng)分、廢物）和增殖梯度變化。作為優(yōu)良的生理腫瘤模型可以提供比2D細(xì)胞培養(yǎng)更可靠的結(jié)果。細(xì)胞增殖檢測通過檢測WST-1還原為formazan的反應(yīng)。?
【導(dǎo)讀】三維培養(yǎng)細(xì)胞活性及毒性檢測???
Assays?For?Three?Dimensional?Cell?Spheroid?Cultures???細(xì)胞培養(yǎng)于懸滴(hanging?drop),?自組裝形成球狀細(xì)胞簇。?Cayman采用3D?Biomatrix公司的3D細(xì)胞培養(yǎng)平臺，開發(fā)出了兩款全新的試劑盒用于研究Perfecta3D?培養(yǎng)板上的球狀體(spheroid)細(xì)胞。即Perfecta3D?細(xì)胞活力檢測試劑盒及Perfecta3D?細(xì)胞毒性檢測試劑盒，可快速精準(zhǔn)的檢測球狀體的一些基本細(xì)胞過程。
研究復(fù)雜的細(xì)胞和組織，及其信號傳導(dǎo)與調(diào)控可不是件容易事。而模擬細(xì)胞或組織環(huán)境，建立最接近體內(nèi)天然條件的實驗系統(tǒng)同樣困難。這就是3D細(xì)胞培養(yǎng)所面臨的挑戰(zhàn)，3D培養(yǎng)系統(tǒng)旨在更好的模擬細(xì)胞的體內(nèi)生長環(huán)境。近來越來越多的證據(jù)表明，3D細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)比傳統(tǒng)2D培養(yǎng)系統(tǒng)更貼近體內(nèi)的生理條件。美國3D?Biomatrix公司生產(chǎn)的Perfecta3D?懸滴板是一個新的三維細(xì)胞培養(yǎng)平臺，能夠在多孔板模式中形成大小均勻的球狀體懸滴；這種懸滴是細(xì)胞自組裝形成的球狀細(xì)胞簇，是三維（3D）細(xì)胞培養(yǎng)和篩選中研究的最有利的模型之一。同其他類型的3D支架和水凝膠等方法相比，這種球狀體具有簡單性，可重復(fù)性以及生理組織的相似性，能模擬組織腫瘤固有的代謝（氧氣、二氧化碳、養(yǎng)分、廢物）和增殖梯度變化。作為優(yōu)良的生理腫瘤模型可以提供比2D細(xì)胞培養(yǎng)更可靠的結(jié)果。?
圖1.?Perfecta3D?懸滴培養(yǎng)板促進(jìn)細(xì)胞球體在懸滴中的培養(yǎng)。用移液器將細(xì)胞懸液加入每個孔，細(xì)胞自組裝形成的球狀細(xì)胞簇。
應(yīng)用一.?細(xì)胞活性檢測在細(xì)胞研究中，對細(xì)胞活性及細(xì)胞毒理的檢測是一項基本的細(xì)胞學(xué)技術(shù)?，通常采用WST-1法。WST-1是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的可溶性formazan鹽。Formazan產(chǎn)物的吸光度與活細(xì)胞的數(shù)量及活性成正比。
Cayman開發(fā)的Perfecta3D?細(xì)胞活力檢測試劑盒（產(chǎn)品編號：600990）,?提供3D細(xì)胞培養(yǎng)板、WST-1試劑、?電子媒介體溶液（Electron?Mediator?Solution）以及分析用的圓底板。如圖2所示，HEK293細(xì)胞以不同細(xì)胞密度培養(yǎng)于懸滴中，設(shè)置Vehicle對照以及逐漸增加Triton?X-100濃度的實驗組（處理1小時）。然后轉(zhuǎn)移細(xì)胞至圓底板，與WST-1溶液孵育，最后在450nm讀數(shù)。OD值隨細(xì)胞數(shù)升高，隨Triton?X-100濃度的升高而降低。?
圖2.?起始細(xì)胞數(shù)量對450nm吸光度的影響。HEK293細(xì)胞以不同起始細(xì)胞密度加入3D培養(yǎng)板，將培養(yǎng)板移入37度CO2孵育箱中。4天后，細(xì)胞經(jīng)Vehicle,?0.001%或0.01%?Triton?X-100處理1小時，然后轉(zhuǎn)移至圓底板，每孔加入WST-1試劑。細(xì)胞于37度孵育3.5小時后，于450nm測定吸光度。
應(yīng)用二.?細(xì)胞毒性檢測
細(xì)胞膜完整性的喪失是細(xì)胞毒性的表現(xiàn)形式之一，導(dǎo)致細(xì)胞的滲漏。LDH是一個可溶性的胞漿酶，可從受損細(xì)胞釋放到培養(yǎng)基中，因此被用作細(xì)胞溶解、細(xì)胞毒性以及細(xì)胞活性等的標(biāo)志分子。Cayman開發(fā)的Perfecta3D?細(xì)胞毒性檢測試劑盒（產(chǎn)品編號：601050）提供3D細(xì)胞培養(yǎng)板以及檢測LDH的必需試劑。細(xì)胞培養(yǎng)于懸滴中，通常含40-50ul的培養(yǎng)基，如要處理細(xì)胞，可移出10ul培養(yǎng)基，加入含有測試化合物的替換培養(yǎng)基。進(jìn)行細(xì)胞毒性檢測時，可移出10ul培養(yǎng)基，然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至標(biāo)準(zhǔn)的96孔板，用LDH試劑進(jìn)行檢測。490nm讀數(shù)，吸光度與LDH濃度線性相關(guān)（圖3）。
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圖3.?LDH標(biāo)準(zhǔn)曲線。LDH標(biāo)準(zhǔn)品溶于不含F(xiàn)BS的RPMI?1640中，然后每孔加入100ul的反應(yīng)液，室溫孵育30分鐘。