Mirus公司新推出轉(zhuǎn)染試劑TransIT?-Lenti Transfection Reagent,該產(chǎn)品適用于將載體轉(zhuǎn)染至貼壁的HEK 293T細胞中,可提高轉(zhuǎn)染效率,增加重組慢病毒產(chǎn)量。
產(chǎn)品特點:
高性能——高達八倍的功能性滴度
操作簡便——無需更換培養(yǎng)液基?
無動物源性成分——安全可靠
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產(chǎn)品信息
TransIT?-Lenti Transfection Reagent |
產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 供應(yīng)商 |
MIR 6603 | 1 × 0.3 ml | Mirusbio |
MIR 6604 | 1 × 0.75 ml | Mirusbio |
MIR 6600 | 1 × 1.5 ml | Mirusbio |
MIR 6605 | 5 × 1.5 ml | Mirusbio |
MIR 6606 | 10 × 1.5 ml | Mirusbio |
相關(guān)產(chǎn)品推薦——TransduceIT? Transduction Reagent
TransduceIT? Transduction Reagent是一款陽離子聚合物試劑,可顯著提高靜止和分裂期的哺乳動物細胞中逆轉(zhuǎn)錄病毒的轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)基因表達。
產(chǎn)品信息
TransduceIT? Transduction Reagent |
產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 供應(yīng)商 |
MIR 6620 | 1 ml | Mirusbio |
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圖1. TransIT-Lenti轉(zhuǎn)染試劑具有高功能性滴度.分別使用TransIT-Lenti (3:1, vol:wt), Lipofectamine? 2000 (3:1), Lipofectamine? 3000 (3:1:1), 25 kDa PEI (6:1), 和CaPO4 precipitation (4 μg pDNA/well)五種試劑將MISSION?載體(pLKO.1-puro-CMV-TurboGFP?載體和慢病毒包裝試劑)轉(zhuǎn)染至貼壁293T/17細胞中。收集上清液,過濾(0.45 μm),用293T/17細胞滴定。慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)實驗使用了TransduceIT?(8 μg/ml),轉(zhuǎn)導(dǎo)72h后使用guava easyCyte? 5HT流式細胞儀檢測GFP表達情況。功能性滴度根據(jù)病毒的稀釋液與20% GFP陽性細胞進行計算。
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圖2. 使用TransIT-Lenti實現(xiàn)高效轉(zhuǎn)染.?使用TransIT?-Lenti轉(zhuǎn)染試劑?(3:1, vol:wt)將MISSION?載體(pLKO.1-puro-CMV-TurboGFP?載體和慢病毒包裝試劑)轉(zhuǎn)染至貼壁293T/17細胞中。轉(zhuǎn)染48h后檢測GFP效率。圖片于轉(zhuǎn)染48h后拍自熒光顯微鏡。鏡下細胞變圓和細胞融合是由于假型化重組慢病毒的VSV-G 蛋白的高表達。
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重組慢病毒顆粒和靶細胞感染概述
(1)?將包括編碼目的基因、水泡性口炎G蛋白(VSV-G)和必需的病毒蛋白(例如gag,pol和rev)的3-4種質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至生產(chǎn)細胞(例如293T)中。
(2)?病毒從生產(chǎn)細胞漿膜以出芽的方式組裝及釋放到上清液中,并以VSV-G的囊膜蛋白包裹。將含有病毒的培養(yǎng)液用0.45微米的濾器進行過濾以除去細胞。
(3)?重組慢病毒顆粒轉(zhuǎn)導(dǎo)靶細胞常用陽離子聚合物來增加聚合和攝取。病毒進入細胞后脫衣殼,將RNA基因組和病毒的酶暴露出來。病毒RNA被逆轉(zhuǎn)錄成DNA,然后整合到宿主基因組中。
(4)?轉(zhuǎn)錄和翻譯后由細胞產(chǎn)生目的基因所編碼的蛋白質(zhì)。
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