Jackson精品推薦——Anti-Human IgE Antibodies
Jackson?lmmunoResearch推出一系列適用于診斷試劑研發(fā)的Mouse Monoclonal Anti-Human IgE antibodies（小鼠抗人IgE單克隆抗體），補(bǔ)充了Jackson現(xiàn)有的抗人lgG、IgM和lgA抗體產(chǎn)品，抗人IgE可與一系列特定的報(bào)告分子偶聯(lián)（如堿性磷酸酶和生物素），使其具有極強(qiáng)的靈敏度。
?
Jackson?ImmunResearch Anti-Human IgE
Jackson ImmunoResearch可提供兩個(gè)不同克隆號(hào)（ME.114和ME.10A10）的抗人IgE抗體，均為小鼠來(lái)源的單克隆抗體，與人lgE反應(yīng)，并且是ε鏈特異的。
小鼠抗人IgE（Clone: ME.114, Cat#209-002-241）可與一系列報(bào)告分子偶聯(lián)，并可在多種實(shí)驗(yàn)應(yīng)用中檢測(cè)人IgE，如ELISA、側(cè)向免疫層析、流式細(xì)胞術(shù)、WB和化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）。
小鼠抗人IgE（Clone: ME.10A10，Cat#209-002-244）是未標(biāo)記的純化抗體，在夾心法檢測(cè)中可作為捕獲抗體與標(biāo)記的抗人IgE抗體（Clone: ME.114）配對(duì)使用。
?
產(chǎn)品信息
標(biāo)記類(lèi)型 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號(hào) | 規(guī)格 |
Unconjugated | IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114) | 209-002-241 | 0.1 mg |
IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (10A10) | 209-002-244 | 0.1 mg |
Horseradish Peroxidase | Peroxidase IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114) | 209-032-241 | 0.5 ml |
Alkaline Phosphatase | Alkaline Phosphatase IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114) | 209-052-241 | 0.5 ml |
Biotin-SP (long spacer) | Biotin-SP (long spacer) IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114) | 209-062-241 | 0.25 ml |
Fluorescein (FITC) | Fluorescein (FITC) IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114) | 209-092-241 | 0.25 mg |
R-Phycoerythrin | R-Phycoerythrin IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114) | 209-112-241 | 0.1 ml |
40 nm Colloidal Gold | 40 nm Colloidal Gold IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114) | 209-402-241 | 1 ml |
?
特異性
Jackson ImmunoResearch抗人IgE?ε鏈特異性抗體已通過(guò)ELISA測(cè)試，結(jié)果顯示該抗體對(duì)人IgG、IgM或IgA具有最小的交叉反應(yīng)性。圖1為驗(yàn)證抗人IgE抗體（Clone: ME.114和ME.10A10）特異性的WB結(jié)果圖，結(jié)果顯示未檢測(cè)到其他類(lèi)型的免疫球蛋白信號(hào)。Jackson未測(cè)試是否可以檢測(cè)到其他物種的免疫球蛋白。
?
圖1.?
A.?直接蛋白印跡顯示Anti-Human IgE antibody(ME.114)對(duì)人IgE的特異性。每孔分別上樣2ug純化的人免疫球蛋白（IgE、IgG、IgA和IgM）。SDS-PAGE在非還原條件下進(jìn)行，并將蛋白質(zhì)印跡到硝化纖維素膜上。用含5%BSA的PBS/T封閉，并用HRP標(biāo)記的Anti-Human IgE（Cat#209-032-241）以1:10000稀釋孵育，使用ECL顯色。
B. 間接蛋白印跡顯示Anti-Human IgE antibody (10A10)抗人IgE（Clone: ME.10A10）對(duì)人IgE的特異性。每孔分別上樣250ng純化的人免疫球蛋白（IgE、IgG、IgA和IgM）。SDS-PAGE在非還原條件下進(jìn)行，并將蛋白質(zhì)印跡到硝化纖維素膜上。用含5%BSA的PBS/T封閉，2ug/mL的Anti-Human IgE（Cat#209-002-244）孵育。PBS/T洗滌后，用HRP標(biāo)記的抗小鼠IgG（Cat#715-035-150）以1:10000稀釋孵育，使用ECL顯色。
圖2.?
A. 在還原和非還原條件下使用Anti-Human IgE (clone number ME.114)檢測(cè)100ng純化人IgE的WB結(jié)果。
B. 在還原和非還原條件下使用Anti-Human IgE (clone number 10A10)檢測(cè)100ng純化人IgE的WB結(jié)果。
注：抗人IgE（Clone: ME.114）和抗人IgE（Clone: ME.10A10）對(duì)還原IgE表現(xiàn)出較弱的信號(hào)，因此不建議兩者用于檢測(cè)還原IgE。
?
靈敏度
Jackson ImmunoResearch抗人IgE抗體檢測(cè)各種來(lái)源的人IgE均具有優(yōu)異的靈敏度。圖3展示了Anti-Human IgE (clone number ME.114)在間接ELISA中檢測(cè)兩種不同濃度IgE包被板的靈敏度。圖4展示了Anti-Human IgE（Clone: ME.114）在間接ELISA中檢測(cè)不同骨髓瘤和血漿來(lái)源純化IgE的靈敏度。
?
圖3：間接法ELISA檢測(cè)人IgE。每孔加入100ul含2或0.2ug/ml的人血漿中純化的IgE的碳酸鹽包被緩沖液進(jìn)行包被，4℃過(guò)夜。每孔加入300ul含1%BSA（Cat#001-000-161，不含IgG、蛋白酶）的PBS/T封閉2小時(shí)。用PBS/T將一抗Anti-Human IgE（Cat#209-002-244）以1:3在板上連續(xù)稀釋?zhuān)⒃谑覝叵路跤?小時(shí)。二抗Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG, Fcγ fragment specific (min X Hu, Bov, Hrs Sr Prot)（Cat#115-035-071），用PBS/T中以1:20000稀釋?zhuān)跤?.5小時(shí)。加入TMB 30分鐘后在620nm處讀數(shù)。
?
圖4：間接法ELISA檢測(cè)不同來(lái)源的人IgE。每孔加入100ul含2ug/ml純化人IgE的碳酸鹽包被緩沖液進(jìn)行包被，4℃過(guò)夜。每孔加入300ul含1%BSA（Cat#001-000-161）的PBS/T在室溫下封閉2小時(shí)。用PBS/T將一抗Anti-Human IgE（Cat#209-002-241）以1:3在板上連續(xù)稀釋?zhuān)⒃谑覝叵路跤?小時(shí)。二抗Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG, Fcγ fragment specific (min X Hu, Bov, Hrs Sr Prot)（Cat#115-035-071）以1:20000稀釋?zhuān)跤?.5小時(shí)。加入TMB 30分鐘后在620nm處讀數(shù)。?
?
檢測(cè)血漿中IgE
Jackson ImmunoResearch抗人IgE與其配對(duì)的捕獲抗體配合用于夾心法ELISA時(shí)具有極好的靈敏度。兩種不同的單克隆抗體可以配對(duì)使用以進(jìn)行捕獲和檢測(cè)。在這種情況下，用牛血清白蛋白（Cat#001-000-161，不含IgG與蛋白酶）封閉前，使用未標(biāo)記的Anti-Human IgE（Clone: ME.10A10，Cat#209-002-244）作為包被抗體，洗滌后，與稀釋后的樣品一起孵育。選擇標(biāo)記的Anti-Human IgE antibody，例如Alkaline Phosphatase Anti-Human IgE (Cat#209-052-241)，或者Peroxidase Anti-Human IgE (Cat#209-032-241)，接著使用合適的底物或顯色技術(shù)。圖5展示了直接夾心法ELISA驗(yàn)證非偶聯(lián)的抗人IgE與堿性磷酸酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體搭配使用來(lái)定量檢測(cè)患者樣本中的總IgE。本實(shí)驗(yàn)中使用樣本的總IgE（kIU/l）已通過(guò)羅氏Cobas Total IgE assay檢測(cè)（結(jié)果詳見(jiàn)圖5的X軸）。
?
圖5. 直接夾心法ELISA檢測(cè)人血清和血漿樣品中的總IgE。用2ug/ml未標(biāo)記的Anti-Human IgE（Clone: ME.10A10，Cat#209-002-244）包板，100μl/孔，4℃過(guò)夜。每孔加入300ul含1%BSA（Cat#001-000-161）的PBS/T（0.05%吐溫）封閉1.5小時(shí)，隨后加入用PBS/T以1:80稀釋的樣品孵育1小時(shí)，100ul/孔。檢測(cè)抗體，堿性磷酸酶偶聯(lián)的抗人IgE（Cat#209-055-241），用PBS/T中以1:10000稀釋?zhuān)?00ul/孔孵育1小時(shí)。每孔加入100ul 新鮮配制的DEA底物孵育30分鐘，在405nm處讀數(shù)。
?
推薦稀釋倍數(shù)
下表中的建議稀釋倍數(shù)用范圍表示，因?yàn)樽罴训南♂尪扰c許多因素有關(guān)，如抗原密度，滲透性等。使用者應(yīng)根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)來(lái)確定抗體最佳的工作濃度。
Conjugate | ELISA | Weatern Blot* | Flow Cytometry |
Uncojugated |
| 10-20 ug/ml |
|
FITC |
| 1:50—1:200 |
|
R-PE |
|
| 1:50—1:200 |
Horseradish Peroxidase | 1:5,000—1:100,000 | 1:5,000—1:100,000 (non-ECL) 1:10,000—1:200,000 (ECL) |
|
Alkaline Phosphatase | 1:5,000—1:50,000 | 1:5,000—1:50,000 |
|
Biotin-SP(using Fluorphore-Conjugates Streptavidin) |
|
| 1:200—1:1,000 |
Biotin-SP(using enzyme-Conjugates Streptavidin) | 1:20,000—1:400,000 | 1:20,000—1:400,000 |
|
*請(qǐng)注意，當(dāng)檢測(cè)還原性蛋白質(zhì)時(shí)，該抗體將給出較弱的信號(hào)，因此不建議用于需要通過(guò)蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)還原IgE的應(yīng)用。
?
?
參考文獻(xiàn)
1.?Cox, L., Larenas-Linnemann, D., Lockey, R. and Passalacqua, G., 2010. Speaking the same language: The World Allergy Organization Subcutaneous Immunotherapy Systemic Reaction Grading System. Journal of Allergy and Clinical Immunology, 125(3), pp.569-574.e7.
2.?Pawankar, R., Canonica, G., Holgate, S., and Lockey, R., 2011. World Allergy Organization (WAO) white book on allergy. United Kingdom: WAO.
3.?Sánchez-Borges, M., Ansotegui, I. & Cox, L. World Allergy Organization Grading System for Systemic Allergic Reactions: it Is Time to Speak the Same Language When it Comes to Allergic Reactions. Curr Treat Options Allergy 6, 388–395 (2019). https://doi.org/10.1007/s40521-019-00229-8.
?
詳情請(qǐng)咨詢 Jackson ImmunoResearch 中國(guó)授權(quán)代理-欣博盛生物科技 ???
全國(guó)服務(wù)熱線: 4006-800-892? 郵箱: market@neobioscience.com ?
深圳: 0755-26755892? ? ? 北京: 010-88594029? ? ? 上海: 021-34613729? ? ? ? ?? ?
廣州：020-87615159? ? ? 香港: 852-69410778 ?
代理品牌網(wǎng)站: m.smblzp.com ?
自主品牌網(wǎng)站: www.neobioscience.net