PlasmoTest?
細(xì)胞比色分析法
? 靈敏：培養(yǎng)上清液中檢測限 5.10^2- 5.10^5 cfu/ml
? 可靠：無假陽性
? 快速：操作時(shí)間<1小時(shí)。過夜培養(yǎng)后可見結(jié)果
? 簡單：使用細(xì)胞培養(yǎng)上清液進(jìn)行比色檢測
PlasmoTestTM 在細(xì)胞培養(yǎng)中的靈敏度
支原體物種 靈敏度 (cfu/ml)
Acholeplasma laidlawii? 2.5 x 10^3
Mycoplasma arginini? 2 x 10^3
Mycoplasma fermentans? 5 x 10^2
Mycoplasma hominis? 6 x 10^3
Mycoplasma hyorhinis? 7 x 10^2
Mycoplasma orale? 5 x 10^5
Mycoplasma salivarium? 1 x 10^4
InvivoGen擁有專利的HEK-BlueTM-2細(xì)胞，穩(wěn)定表達(dá)人源 TLR2（支原體脂肽的主要傳感器）以及一個(gè)NF-κB誘導(dǎo)的SEAP（分泌型胚胎堿性磷酸酶）報(bào)告基因。HEK-BlueTM-2細(xì)胞可直接在HEK-BlueTM檢測培養(yǎng)基中培養(yǎng)，便于檢測，是常規(guī)檢測的理想選擇。向這些細(xì)胞中簡單地添加測試樣品可以得到比色結(jié)果，其靈敏度與基于生物化學(xué)發(fā)光的分析法相近。培養(yǎng)上清液樣品中SEAP報(bào)告基因的活性可使用分光光度計(jì)在620-655 nm下測量。吸光度與污染物的量成正比。
使用PlasmoTest?的5大原因
1.PlasmoTestTM能檢測所有引起細(xì)胞培養(yǎng)污染的支原體物種。
2.PlasmoTestTM的陽性結(jié)果（沒有假陽性）能顯示細(xì)胞培養(yǎng)受到支原體或細(xì)菌的污染（見常見問題解答）。
3.檢測方法可在96孔板上進(jìn)行，方便管理多個(gè)細(xì)胞系的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行常規(guī)檢測。
4.只需要購買此試劑盒一次，HEK-BlueTM-2細(xì)胞制備凍存可供以后使用。其他試劑能分開購買補(bǔ)充。
5.產(chǎn)品包括一本實(shí)驗(yàn)程序指南及疑難排解部分。
常用支原體檢測方法
| 檢測方法 | 數(shù)據(jù)讀出 | 主要缺點(diǎn)
|
MycoFluor? Mycoplasma? Detection Kit | 熒光 | -苛求的載玻片制備 -壞死/凋亡細(xì)胞和細(xì)菌， 以及細(xì)胞碎片產(chǎn)生假陽性 -低靈敏度 |
| LookOut Mycoplasma PCR? Detection Kit | PCR | - PCR可能受到抑制 （假陰性） -只提供有限支原體 物種的引物 |
| MycoAlert? Mycoplasma? Detection Kit? | 生物發(fā)光 | -需要光度計(jì) -不包括陽性和陰性 對照組 |
| MycoProbe? Mycoplasma? Detection Assay | 基于DNA的 ELISA | -多步驟（ELISA） -非特異性結(jié)合風(fēng)險(xiǎn) （假陽性） -必須避免RNase污染 |
如何保持細(xì)胞培養(yǎng)無支原體污染?
常見問題
問： PlasmoTest?是否只檢測活支原體？
答： PlasmoTest?檢測支原體脂蛋白的存留，因此能夠檢測細(xì)胞培養(yǎng)中活的和死的支原體。
問： PlasmoTest?能否檢測生物試劑如培養(yǎng)基或胎牛血清中支原體的存在？
答： 可以，檢測靈敏度在培養(yǎng)基中為 10^3 cfu/ml 。在胎牛血清中為 10^4 cfu/ml 。
問： PlasmoTest?能否檢測細(xì)胞培養(yǎng)物中的細(xì)菌？
答： PlasmoTest?的原理基于TLR2的激活,因此可以同時(shí)檢測支原體和細(xì)菌污染物。而且相對于肉眼無法檢測的支原體，細(xì)菌污染會導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)明顯改變。
細(xì)菌生長可以導(dǎo)致pH值降低（培養(yǎng)液變?yōu)辄S色）和培養(yǎng)液變渾濁。
問： 有沒有一個(gè)最佳的波長來讀取樣品？
答： 620 nm到655 nm之間的任何波長都適合。
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