TAU蛋白實驗操作指南

硫黃素T 檢測實驗操作指南

一.在蒸餾水中制備 1mM 的硫黃素T儲備液 (需是新鮮制備并用0.2 μm 注射式過濾器過濾).

二.然后用PBS pH 7.4將每個孔中的硫黃素T 儲備液稀釋至最終濃度為 25 μM (每孔容量 = 100 μL).

三.向每個孔中加入10 uM肝素.

四.于室溫下將分裝小份的tau蛋白在使用前進行解凍.

五.將纖維原或單體 (或兩者都有) 加入到合適的實驗孔中. 用移液器上下吸放混合孔中物質(zhì).

六.將孔板密封并放置于震蕩孵育器上(800 rpm)，溫度為 37°.

七.用 Molecular Devices Gemini XPS 微孔板讀板機讀取熒光讀數(shù), 使用軟件是 Softmax Pro 版本為 6.5.1.

八.再次將孔板密封放置于震蕩孵育器上, 溫度為37°C.

九.在1 到 72 小時之間的固定間隔讀數(shù).

孔板: Greiner-Bio 96 Well Non-Binding Cell Culture Microplate, 黑色 (Greiner-Bio Catalog #655900).

XPS 酶標(biāo)儀參數(shù)設(shè)置:

溫度: 37°C

讀取形式: 孔板掃描

波長: 激發(fā)光 450 nm，發(fā)射光 485 nm

PMT 增益: 自動

閃光每讀: 6

震蕩: 讀數(shù)前 20 秒

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