細(xì)胞培養(yǎng)的基本條件：
1、合適的細(xì)胞培養(yǎng)基
合適的細(xì)胞培養(yǎng)基是體外細(xì)胞生長增殖的重要的條件之一，培養(yǎng)基不僅提供細(xì)胞營養(yǎng)和促使細(xì)胞生長增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，而且還提供培養(yǎng)細(xì)胞生長和繁殖的生存環(huán)境。
2、血清
目前，大多數(shù)合成培養(yǎng)基都需要添加血清。血清是細(xì)胞培養(yǎng)液中重要的成分之一，含有細(xì)胞生長所需的多種生長因子及其它營養(yǎng)成分。
3、無菌無毒細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境
無菌無毒的操作環(huán)境和培養(yǎng)環(huán)境是保證細(xì)胞在體外培養(yǎng)成功的首要條件。
在體外培養(yǎng)的細(xì)胞由于缺乏對(duì)微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物質(zhì)污染，或者自身代謝物質(zhì)積累，可導(dǎo)致細(xì)胞中毒死亡。因此，在體外培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，必須保持細(xì)胞生存環(huán)境無菌無毒，及時(shí)清除細(xì)胞代謝產(chǎn)物。
4、恒定的細(xì)胞生長溫度
維持培養(yǎng)細(xì)胞旺盛生長，必須有恒定而適宜的溫度。不同種類的細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)溫度要求也不同，人體細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為36。5℃±0。5℃，偏離這一溫度范圍，細(xì)胞的正常代謝會(huì)受到影響，甚至死亡。
培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)低溫的耐受力較對(duì)高溫強(qiáng)，溫度上升不超過39℃時(shí)，細(xì)胞代謝與溫度成正比；人體細(xì)胞在39-40℃1小時(shí)，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復(fù)；在40-41℃1小時(shí)，細(xì)胞會(huì)普遍受到損傷，僅小半數(shù)有可能恢復(fù)；41-42℃1小時(shí)，細(xì)胞受到嚴(yán)重?fù)p傷，大部分細(xì)胞死亡，個(gè)別細(xì)胞仍有恢復(fù)可能；當(dāng)溫度在43℃以上1小時(shí)，細(xì)胞全部死亡。
相反，溫度不低于0℃時(shí)，對(duì)細(xì)胞代謝雖有影響，但并無傷害作用；把細(xì)胞放入25-35℃時(shí)，細(xì)胞仍能生存和生長，但速度減慢；放在4℃數(shù)小時(shí)后，再回到37℃培養(yǎng)，細(xì)胞仍能繼續(xù)生長。細(xì)胞代謝隨溫度降低而減慢。當(dāng)溫度降至冰點(diǎn)以下時(shí)，細(xì)胞可因胞質(zhì)結(jié)冰受損而死亡。
但是，如果向培養(yǎng)液中加入一定量的冷凍保護(hù)劑（二甲亞砜或甘油），可在深低溫下如-80℃或-196℃（液氮）長期保存。
5、合適的氣體環(huán)境
氣體是哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)生存必需條件之一，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。
讓細(xì)胞活潑的六大小訣竅：
1. 保證所有實(shí)驗(yàn)室材料都無菌
穿插污染是細(xì)胞培育的大敵。即使是輕微的污染，也或許毀了幾個(gè)星期的效果，因培育箱內(nèi)溫暖濕潤，真菌極易成長，因而有必要注意定時(shí)清潔。
此外，在將培育瓶、移液管及其他的相關(guān)物品放入超凈臺(tái)之前，運(yùn)用酒精擦拭干凈，以防止污染。
2. 選擇上佳的培育基開發(fā)策略
在細(xì)胞培育進(jìn)程中，培育基是操控產(chǎn)品質(zhì)量、產(chǎn)量和本錢的重要要素。有必要針對(duì)每種培育物來定制培育基，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)成果，在決定以哪種方法來開發(fā)您的培育基時(shí)，您需要考慮時(shí)間和本錢等要素。
3. 在傳代之前不要讓細(xì)胞徹底集合
集合度是指貼壁細(xì)胞占有培育瓶表面積的份額。徹底集合意味著100%的表面都被貼壁細(xì)胞覆蓋，一定要防止這種狀況，由于它意味著細(xì)胞不能繼續(xù)成長。不過，燃眉之急是運(yùn)用活潑成長的細(xì)胞。
4. 運(yùn)用對(duì)數(shù)成長期的細(xì)胞
細(xì)胞培育進(jìn)程共有3個(gè)階段：停滯期、對(duì)數(shù)期和平臺(tái)期，分別代表了低細(xì)胞成長、高細(xì)胞成長和無細(xì)胞成長，有生機(jī)的細(xì)胞是健康的，快速分裂的，在對(duì)數(shù)期以70-80%的集合度存在。
5. 在運(yùn)用前正確解凍細(xì)胞
盡管解凍看起來是個(gè)簡略的步驟，但有必要操作得當(dāng)，防止損傷細(xì)胞。長期暴露在高溫條件下會(huì)使細(xì)胞無法鋪板，因而，凍存管應(yīng)當(dāng)在37°C水浴中放置2分鐘，然后用條件培育基稀釋，以防止DMSO造成直接損傷。
6. 小心處理您的培育物
細(xì)胞培育的脆弱性怎樣強(qiáng)調(diào)也不為過。劇烈搖晃，或接連的溫度波動(dòng)或許會(huì)對(duì)成長發(fā)生不利的影響。保證培育箱是水平的，溫度均一，且遠(yuǎn)離電動(dòng)儀器。
此外，盡量防止一次處理多個(gè)細(xì)胞系，由于它或許會(huì)影響細(xì)胞的基因型和表型。
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