該免疫印跡實(shí)驗(yàn)方法僅供參考，由于每個實(shí)驗(yàn)使用的試劑不同，并且涉及不同的物種，組織類型及實(shí)驗(yàn)應(yīng)用，實(shí)驗(yàn)人員設(shè)計(jì)應(yīng)根據(jù)具體情況設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)步驟和改良。

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阻斷

1.使用 5% 脫脂奶粉溶于 1X TBST 作為阻斷緩沖液.

2.使用足夠多的阻斷緩沖液確保凝膠被完全覆蓋.

3.室溫下阻斷并震蕩1小時.

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沖洗

1.1X TBST 中沖洗3次，每次4分鐘，然后1X TBS中沖洗 3次，每次4分鐘.

2.確保在盒子里一直都有足夠的沖洗緩沖液.

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一抗孵育

1.將一抗在 TBST中稀釋.

2.室溫下震蕩孵育 2 小時.

3.時而檢查凝膠確認(rèn)其完全被抗體溶液覆蓋.

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沖洗

1.1X TBST 中沖洗3次，每次4分鐘，然后1X TBS中沖洗 3次，每次4分鐘.

2.確保在盒子里一直都有足夠的沖洗緩沖液.

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二抗孵育

1.在1X TBST (濃度根據(jù)使用的抗體而定) 中制備二抗.

2.室溫下震蕩孵育 1 小時.

3.時而檢查凝膠確認(rèn)其完全被抗體溶液覆蓋.

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沖洗

1.1X TBST 中沖洗3次，每次4分鐘，然后1X TBS中沖洗 3次，每次4分鐘.

2.確保在盒子里一直都有足夠的沖洗緩沖液.

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檢測

ECL檢測試劑的用量取決于凝膠的大小. 通常來說, 用量需要足夠完全覆蓋凝膠.

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1.1:1 混合溶液 A 和溶液 B.

2.用鑷子夾起凝膠，輕輕拍在無塵擦紙上，去除凝膠上多余的 Tris.

3.把凝膠放在新的干凈的盒子里，加入檢測試劑，確保凝膠均勻的被覆蓋.

4.在黑暗中孵育凝膠 5 分鐘.

5.用鑷子夾起凝膠，用無塵擦紙洗掉多余的試劑.

6.凝膠成像.

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