外泌體是指包含了復(fù)雜 RNA 和蛋白質(zhì)的小膜泡 (30-150nm),現(xiàn)今,其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年,外泌體首次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn), 1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中 。
外泌體的提?。ㄌ峒儯┲饕ㄒ韵聨追N方式:
一是超速離心法:這是外泌體提取最常用的方法 。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊, 由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn),也有一些研究認(rèn)為此種 方法得到的是微泡不是外泌體 ;
二是過濾離心:這種操作簡單、省時,不影響外泌體的生物活性 ,但同樣存在純度不足的問題;
三是密度梯度離心法:用此種方法分離到的外泌體純度高,但是前期準(zhǔn)備工作繁雜,耗時,量少;
四是免疫磁珠法:這種方法可以保證外泌體形態(tài) 的完整,特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設(shè)備,但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性,不便進(jìn)行下一步的實驗;
五是PS親和法:該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結(jié)合,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似,獲得的外泌體形態(tài)完整,純度最高。由于不使用變性劑,不影響外泌體的生物活性,外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。2016.9《Scientific Reports》雜志發(fā)表了該方法最新數(shù)據(jù),表明PS法可提取相當(dāng)高純度的外泌體;
六是色譜法:這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一, 但是需要特殊的設(shè)備,應(yīng)用不廣泛 。
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