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關(guān)于Cosmobio purefrex產(chǎn)品介紹

2021-08-09
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PUREfrex???——重組無細(xì)胞蛋白合成系統(tǒng)

PUREfrex?是一種基于PURE系統(tǒng)技術(shù)新開發(fā)的體外轉(zhuǎn)錄/翻譯偶聯(lián)系統(tǒng),與S30體外翻譯系統(tǒng)不同,PUREfrex?是重組無細(xì)胞蛋白合成系統(tǒng),反應(yīng)系統(tǒng)由蛋白質(zhì)、核糖體、氨基酸和NTPs組成。只需將編碼感興趣蛋白質(zhì)的DNA(mRNA)與試劑盒中溶液IIIIII混合,37℃孵育反應(yīng)數(shù)小時(shí),即可完成蛋白質(zhì)合成。構(gòu)成PUREfrex?試劑盒的蛋白質(zhì)、核糖體和tRNA的制備方法較原PURE體系有所改進(jìn),減少了與蛋白質(zhì)合成無關(guān)的污染物質(zhì)。且PUREfrex?試劑盒中所含的翻譯因子和其他蛋白均不包含標(biāo)簽序列,后續(xù)可添加任何標(biāo)簽來純化和檢測(cè)合成的蛋白質(zhì)。


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〉參考文獻(xiàn)
Shimizu et al. (2001) Nat. Biotechnol., vol. 19, p. 751. PubMed ID:?
11479568
Shimizu et al. (2005) Methods, vol. 36, p. 299. PubMe ID:?
16076456

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產(chǎn)品特點(diǎn)

●?消除了細(xì)胞提取物中的雜蛋白,合成的表達(dá)產(chǎn)物分辨率更高;

●?可以同時(shí)加入多種模板進(jìn)行反應(yīng),以合成Fab及多聚體;

●?可直接使用PCR產(chǎn)物來作為模板DNA

●?單位體積內(nèi)合成的蛋白量幾乎恒定;

●?操作簡(jiǎn)便,37℃數(shù)小時(shí)即可合成;

●?所有的蛋白成分均不包含標(biāo)簽序列,可使用任何標(biāo)簽來純化和檢測(cè)合成的蛋白質(zhì);

●?可合成活細(xì)胞難以合成的強(qiáng)毒性蛋白。

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PUREfrex?不同版本的選擇?

PUREfrex?2.0?- 蛋白質(zhì)合成量更高,大大降低了RNase?-半乳糖苷酶的污染,并將每1μL反應(yīng)混合物的脂多糖(LPS)水平降低至約0.1 EU。

PUREfrex?2.1?-??2.1版本試劑盒以2.0版本為基礎(chǔ),未預(yù)混還原劑。主要用于合成含有二硫鍵的靶蛋白。

PUREfrex?1.0?- 蛋白質(zhì)合成量少于2.02.1版本,但1.0版本反應(yīng)組分的完整信息已公開。

PUREfrex?1.0 Custom?- 廠家可提供基于PUREfrex?1.0試劑盒的定制產(chǎn)品。

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PUREfrex?2.0試劑盒

PUREfrex?2.0PUREfrex??1.0的優(yōu)化版。大大減少了RNaseβ-半乳糖苷酶的污染,此外,每1μL反應(yīng)混合物的脂多糖(LPS)水平降低至約0.1 EU。與PUREfrex?1.0相比,蛋白質(zhì)合成量提高了2-10倍。

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1. 合成原核及真核生物蛋白質(zhì)的結(jié)果顯示:與PUREfrex?1.0相比,使用PUREfrex?2.0合成時(shí),以上6種蛋白質(zhì)的合成量都有增加。

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2. 與原始PURE系統(tǒng)相比,PUREfrex?2.0大大減少了RNaseβ-半乳糖苷酶的污染,此外,每1μL反應(yīng)混合物的脂多糖(LPS)水平降低至約0.1 EUPUREfrex?2.0組分的改進(jìn)純化大大降低了污染物的水平。

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PUREfrex?2.0試劑盒組成

試劑

體積

組分說明

Solution?I

125 μL

氨基酸, NTPs, tRNAs和酶底物等

Solution?II

12.5 μL

蛋白質(zhì)(30%甘油緩沖液中)

Solution?III

25 μL

核糖體(20 μM

DHFR DNA

10 μL

含有大腸桿菌二氫葉酸還原酶(DHFR)基因的PCR產(chǎn)物作為陽性對(duì)照。(20 ng /μL)


產(chǎn)品列表

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

總反應(yīng)體積

試劑盒

PUREfrex?2.0

GFK-PF201-0.25-EX

250 μL

GFK-PF201-0.25-5-EX

250 μL×5

PUREfrex?2.1

GFK-PF213-0.25-EX

250 μL

GFK-PF213-0.25-5-EX

250 μL×5

PUREfrex?1.0

GFK-PF001-0.25-EX

250 μL

GFK-PF001-0.25-EX

250 μL×5

PUREfrex?補(bǔ)充試劑(請(qǐng)根據(jù)用途選擇蛋白質(zhì)合成反應(yīng)液和添加劑)

DnaK Mix

GFK-PF003-0.5-EX

用于500ul的反應(yīng)混合物

GroE Mix

GFK-PF004-0.5-EX

用于500ul的反應(yīng)混合物

DsbC Set

GFK-PF005-0.5-EX

用于500ul的反應(yīng)混合物

PDI Set

GFK-PF006-0.5-EX

用于500ul的反應(yīng)混合物

EF-P

GFK-PFS052-0.5-EX

用于500ul的反應(yīng)混合物




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