如何挑選內(nèi)參抗體

2021-06-23

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什么是內(nèi)參？

Western Blot常用來(lái)比較不同條件下或不同細(xì)胞組織中目標(biāo)蛋白表達(dá)量的相對(duì)多少，因此必須先確定上樣量相同，才有比較的基礎(chǔ)。在Western Blot實(shí)驗(yàn)中，可能因總蛋白濃度測(cè)定不準(zhǔn)確，或是蛋白質(zhì)上樣時(shí)因操作產(chǎn)生誤差，所以必須設(shè)置內(nèi)部參照組來(lái)進(jìn)行校正。此內(nèi)部參照必須在不同細(xì)胞或組織間表達(dá)相對(duì)恒定，且有高水平的表達(dá)量，來(lái)確保不同樣品間蛋白定量相同。而這樣的參照蛋白，就稱為內(nèi)參，對(duì)應(yīng)的抗體就稱為內(nèi)參抗體。

內(nèi)參在WB實(shí)驗(yàn)中的重要性。

1 用于校正蛋白水平，確保不同樣品間蛋白定量（上樣量）相同?？蓮臈l帶粗細(xì)初步判定上樣量是否有差異。進(jìn)一步使用影像分析程序?qū)⒛繕?biāo)蛋白量除以內(nèi)參含量，所得到的數(shù)值即為校正后的目標(biāo)蛋白相對(duì)含量，如此就可以進(jìn)行目標(biāo)蛋白相對(duì)量的比較。

2 確認(rèn)轉(zhuǎn)膜、顯色等步驟是否均勻轉(zhuǎn)移、呈色。內(nèi)參一般選用高表達(dá)的蛋白，因此也可通過(guò)內(nèi)參的條帶，觀察WB實(shí)驗(yàn)中的轉(zhuǎn)膜、顯色等步驟是否有異常。

3對(duì)文章發(fā)表絕對(duì)重要，增加實(shí)驗(yàn)的可信度。文章內(nèi)放上內(nèi)參的數(shù)據(jù)，較有說(shuō)服力，文獻(xiàn)審核者也會(huì)較相信實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

如何挑內(nèi)參抗體

通常會(huì)挑選各細(xì)胞或組織間穩(wěn)定表達(dá)、并且不受實(shí)驗(yàn)影響的蛋白作為內(nèi)參，但不同的實(shí)驗(yàn)還是有一些細(xì)節(jié)要注意，挑選內(nèi)參可參考下面四點(diǎn)：

如何挑選內(nèi)參抗體 ?