目前檢測microRNAs的挑戰(zhàn)是通常兩個傳統(tǒng)的PCR引物不適合miRNA目標(biāo),因為引物的組合長度幾乎是microRNAs長度的兩倍。現(xiàn)有的技術(shù)通過使用例如發(fā)夾引物,添加polyA尾,或通過連接添加片段延伸微microRNAs已經(jīng)解決了這個問題,然而,這些方法缺損害了檢測的靈敏度和特異性。此外,這些方法不能檢測在3’端修飾的microRNAs,因為會干擾延伸過程。
BioVendor新推出檢測miRNA的Two-Tailed RT-qPCR方法提供了一個優(yōu)越的解決方案。Two-Tailed RT-qPCR不是使用單一的結(jié)合探針,而是使用兩個半探針(hemiprobes),它們結(jié)合到microRNA的不同片段,并通過折疊的系繩連接。雖然每一個半探針都太短而不能結(jié)合microRNA,但當(dāng)兩者互補時,它們就會協(xié)同結(jié)合。
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圖1. Two-Tailed RT-qPCR檢測原理
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● Two-Tailed RT-qPCR檢測優(yōu)勢:
1. 引物結(jié)合特異性強
2. 形成cDNA后可以使用2個序列特異性引物進行PCR擴增
3. SYBR以及水解探針均可以使用
4. 適用一管多色以及單色qPCR后的雙管多色的反轉(zhuǎn)錄
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●?產(chǎn)品列表
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
RDTTRT50 | Two-Tailed cDNA Synthesis System 50 rxn | 50 rxn |
RDTTPCR150 | Two-Tailed qPCR Master Mix 150 rxn | 150 rxn |
RDTT000****PRI | Two-Tailed RT/ PCR Primers | 50 rxn/ 150 rxn |
****代表不同miRNA名稱編號
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