細胞活性檢測?
細胞活性(Cell Viability)是細胞生物學實驗的一項重要檢測指標，是細胞培養(yǎng)、細胞毒性及生理研究的基礎(chǔ)。Cayman提供多種細胞活性檢測相關(guān)試劑盒，可用于評估細胞增殖、細胞活性、代謝活性、細胞周期、細胞毒性和凋亡等。
細胞增殖檢測，確定活躍分裂細胞的數(shù)量，最直接簡單的方法就是細胞計數(shù)。細胞活性(Cell Viability) 被定義為樣品中健康活細胞的數(shù)量占總細胞的百分比，確定樣本中活細胞及死細胞的數(shù)量。同時，檢測DNA含量或代謝活性也可提供更多相關(guān)信息。
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●?質(zhì)膜完整性（Plasma Membrance Integrity）
評估細胞膜完整性是檢測細胞活性和評估細胞毒性最常用和最直接的方法之一。具有細胞毒性效應的化合物通常會破壞細胞膜的完整性，誘導細胞壞死。如碘化丙啶(Propidium iodide, PI)染料通常被會健康的細胞排除在外，然而當細胞膜有破損時，PI則可自由跨過細胞膜而對細胞核染色。用PI染料可同時區(qū)分健康細胞和死細胞。同樣，Cayman提供的7-AAD細胞活力檢測試劑盒，7-AAD不能進入活細胞但可透過死細胞或受損細胞膜，而標記胞內(nèi)DNA。
或者，細胞膜完整性也可通過監(jiān)測胞內(nèi)物質(zhì)釋放到胞外基質(zhì)來評估。一個最常用的檢測指標就是乳酸脫氫酶LDH分子，其為一種可溶性的胞漿酶。當胞膜損傷時，LDH可快速釋放到細胞培養(yǎng)液中。Cayman提供的LDH細胞毒性檢測試劑盒即可用于檢測細胞壞死膜受損時，LDH的釋放。
健康完整的細胞可經(jīng)過固定、去垢劑破膜處理，通過上述類似的標記方法來研究細胞周期進程。Cayman提供的細胞周期時相鑒定試劑盒利用碘化丙啶/PI，來標記細胞周期不同時相的DNA。由于PI可直接嵌入DNA鏈的堿基對，因此其熒光強度與細胞中DNA含量成正比。根據(jù)染色體的分布，能可靠顯示G0/G1?Vs?S?Vs G2/M期。此外，CFSE細胞分裂檢測試劑盒采用一種熒光染料，可擴散通過活細胞的質(zhì)膜。CFSE在細胞分裂增殖過程中，其熒光強度會隨著細胞的分裂而逐級遞減，標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，因此其熒光強度是親代細胞的一半，根據(jù)這一特性，CFSE可用于檢測細胞增殖，細胞周期的估算及細胞分裂等。7-AAD/CFSE細胞介導的細胞毒性檢測試劑盒，可用于鑒定增殖分裂的細胞，同時標記受損或死細胞的DNA。最后，Cayman提供的細胞自噬/細胞毒性雙染色試劑盒利用自發(fā)熒光探針單丹磺酰尸胺（Monodansylcadaverine?MDC)?以及碘化丙啶PI可同時檢測吞噬泡和死細胞。?
圖1.?細胞凋亡、自噬及壞死途徑
●?線粒體活性與凋亡（Mitochondrial?Activity?and?Apoptosis）??
線粒體最主要的作用是產(chǎn)生ATP，細胞能量的主要來源。此外，線粒體其他的作用還包括參與細胞信號傳導、細胞分化、細胞死亡以及細胞周期調(diào)控和細胞生長等。檢測線粒體的活性也可顯示細胞的健康狀態(tài)。Cayman最近研發(fā)的一系列試劑盒(Mitocheck?Activity?Assay?kits)用于檢測電子傳遞鏈復合物I,?II,?III的活性(詳情請閱讀后續(xù)相關(guān)章節(jié))。線粒體也可通過干擾電子傳遞、氧化磷酸化和ATP生成，或通過釋放能活化caspase家族蛋白酶的蛋白，或改變胞內(nèi)氧化還原電勢等來誘導細胞凋亡。JC-1是一種廣泛用于檢測線粒體膜電位的理想熒光探針。Cayman提供的JC-1?Mitochondiral?Membrance?Potential?Assy能可靠檢測細胞凋亡早期階段的線粒體膜電位變化。Caspase-3?Fluorescence?Assay通過鑒定特異性凋亡標志分子caspase-3的活化，來檢測線粒體誘發(fā)的凋亡。
此外，Cayman還提供多種試劑盒用于檢測凋亡過程中不同時間點的形態(tài)變化。Annexin?V-FITC試劑盒用于檢測凋亡早期膜的不對稱性變化。磷脂不對稱性的分布于細胞質(zhì)膜，其中磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine,?PS)?主要分布于質(zhì)膜內(nèi)層。在細胞凋亡的早期，雖然細胞膜仍保持完整性，但磷脂分布的不對稱性受干擾，磷脂酰絲氨酸外翻，暴露于細胞膜外層。在Ca2+存在時，Annexin?V可與帶負電荷的磷脂如PS結(jié)合。在細胞凋亡的晚期階段，可使用Cayman的?Apoptotic?Bleds?Assay試劑盒進行檢測，該試劑盒利用重組的抗體，與凋亡細胞膜泡上的自身抗原結(jié)合。Multi?Parameter?Apoptosis?Assay?kit聯(lián)合使用4種不同的試劑，同時檢測多種凋亡事件。該獨特的試劑盒利用FITC-Annexin?V結(jié)合物作為探針檢測質(zhì)膜不對稱性，用TMRE作為探針檢測線粒體膜電位，用7-AAD作為膜通透性/細胞活力指示劑，再用Hoechst染料展示細胞核形態(tài)。
●?代謝活性（Metabolic?Activity）?
細胞計數(shù)反映絕對細胞數(shù)的多少，而代謝活性更多是對細胞健康狀態(tài)的評估。將二者結(jié)合起來，便可更全面具體的了解細胞的活性。例如，在抗腫瘤藥物發(fā)現(xiàn)中，其目的可能不需致死細胞而僅需敲除其代謝和增值活性，使細胞維持在預期的靜止狀態(tài)。
檢測代謝活性的一個經(jīng)典方法是利用四唑鹽(Tetrazolium?salts)，其在代謝活躍的細胞線粒體中，被切割形成有色的不溶于水的MTT，或水溶性的XTT,?WST-1和WST-8甲臢(formazan),?然后再測定吸光度。產(chǎn)生的甲瓚染料的量與代謝活躍的細胞數(shù)量直接相關(guān)，可顯示細胞的還原電位。MTT法是細胞增殖檢測最常規(guī)的方法，久享盛譽，具有大量的文獻支持。但是，與一些新的四唑鹽法相比，MTT法靈敏度較低。另一個缺點就是由于MTT經(jīng)還原所產(chǎn)生的甲瓚產(chǎn)物不溶于水，需溶解后才能在分光光度計上讀數(shù)，增加了實驗操作步驟。而XTT,?WST-1和WST-8則產(chǎn)生水溶性的甲瓚產(chǎn)物，省去了后續(xù)的溶解步驟。尤其，WST-8與其它四唑鹽相比，更穩(wěn)定、細胞毒性更低，適用于較長時間孵育，而且WST-8檢測靈敏度比其他四唑鹽更高。Cayman提供的Pertecta3D??Cell?Viability?Kit適用于3D細胞培養(yǎng)，是基于酶催化還原WST-1生成一種甲臢衍生物來進行檢測的。與傳統(tǒng)的放射性[3H]標記的胸腺嘧啶脫氧核苷或非放射性的5-溴-2'-脫氧尿苷(Brdu)方法相比，MTT,XTT,?WST-1和WST-8具有操作簡便的優(yōu)點。
圖2.?NADPH氧化酶產(chǎn)生的活性氧
面對如此眾多的細胞活性檢測試劑盒，哪一款最適合您的研究呢？
| 細胞增殖 | 細胞活性 | 細胞毒性 | 細胞凋亡 | 細胞自噬 |
細胞周期時相檢測試劑盒Cell?Cycle?Phase?Determination?Kit | ● | ● |
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7-AAD細胞活性檢測試劑盒
7-AAD?Cell?Viability?Assay?kit |
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CFSE?細胞分裂檢測試劑盒CFSE?Cell?Division?Assay?Kit | ● |
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7-AAD/CFSE?細胞介導的細胞毒性檢測試劑盒
7-AAD/CFSE?Cell?Mediated?Cytotoxicity?Assay?Kit | ● | ● | ● |
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LDH?細胞毒性檢測試劑盒
LDH?Cytotoxicity?Assay?Kit |
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自噬/細胞毒性雙染試劑盒???????????
Autophagy/Cytotoxicity?Dual?Staining?Kit |
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JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒????????????????????????????
Mitochondrial?Membrane?Potential?Assay?Kit |
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Caspase-3熒光檢測試劑盒????????????????????????????????
Caspase-3?Fluorescence?Assay?Kit |
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Annexin?V?FITC?凋亡檢測試劑盒
Annexin?V?FITC?Assy?Kit |
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凋亡空泡檢測試劑盒?????????????????????????????????????????????
Apoptotic?Blebs?Assay |
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多參數(shù)凋亡檢測試劑盒
Multi-Parameter?Apoptosis?Assay?Kit |
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MTT?細胞增殖檢測試劑盒
MTT?Cell?Proliferation?Assay?Kit | ● | ● | ● |
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XTT?細胞增殖檢測試劑盒
XTT?Cell?Proliferation?Assay?Kit | ● | ● | ● |
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WST-1?細胞增殖檢測試劑盒
WST-1?Cell?Proliferation?Assay?kit | ● | ● | ● |
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WST-8?細胞增殖檢測試劑盒
WST-8?Cell?Proliferation?Assay?kit | ● | ● | ● |
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3D培養(yǎng)細胞活性檢測試劑盒?????????????????????????????
Perfecta?3D??Cell?Viability?Kit | ● | ● | ● |
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(原文By:?Olivia?L.May,?Ph.D.?編譯：欣博盛市場部Harry)
細胞健康狀態(tài)/細胞凋亡分析?(Cell?health/Apoptosis)
?7-AAD?細胞活性分析試劑盒 / ?產(chǎn)品編號：10009856 |
Cayman提供的7-AAD細胞活性分析試劑盒，以7-AAD為熒光探針標記死細胞。7-AAD熒光染料不能進入活細胞但可進入受損細胞或死細胞，進而標記其DNA。雖7-AAD熒光強度不如PI，但其最大發(fā)射光波長較長(激發(fā)光波長488nm,?發(fā)射光波長650nm),?與PE或FITC發(fā)射光譜疊加較小。因此，7-AAD非常適用于同時用FITC或PE標記檢測細胞表面分子或胞內(nèi)抗原的實驗。 |
| 編號 | 名稱 | 規(guī)格 | 保存 | | 400201 | Cell-Based?Assay?7-AAD?Staining?Stock?Solution(1,000X) | 1?Vials/50ul | 4℃ | | 400202 | 7-AAD?Assay?Fixative/Actinomycin?D?Solution | 1?Vials/50ul | 4℃ | | 10009322 | Cell-Based?Assay?Buffer?Tablet | 4?Tablets | Room?Temperature
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| ?7-AAD/CFSE?細胞介導的細胞毒性檢測試劑盒?/ ?產(chǎn)品編號: ?600120 |
| Cayman提供的7-AAD/CFSE?細胞介導的細胞毒性檢測試劑盒利用CFSE標記靶細胞，7-AAD標記死細胞。通過標記可區(qū)分四個細胞群。該試劑盒可快速簡便的在單細胞水平檢測免疫細胞的細胞毒性效應。 |
| 編號 | 名稱 | 規(guī)格 | 保存 | | 400201 | Cell-Based?Assay?7-AAD?Staining?Stock?Solution(1,000X) | 2?Vials/50ul | 4℃ | | 600121 | CFSE?Stock?Solution | 1?Vials/100ul | -20℃ | | 10009322 | Cell-Based?Assay?Buffer?Tablet | 4?Tablets | Romm?Temperature
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?Annexin?V-FITC凋亡檢測試劑盒?/ ?產(chǎn)品編號:?600120 |
 圖.?星孢菌素（Staurosporine）誘導RAW?264.7細胞凋亡。 | 細胞凋亡早期的特點之一就是細胞膜磷脂的重新分布，?如磷脂酰絲氨酸和磷脂酰乙醇胺從脂雙層的內(nèi)膜外翻，從而暴露于細胞表面。磷脂酰絲氨酸殘基的外翻，可通過其高親和力的結(jié)合蛋白Annexin?V進行檢測。Cayman研發(fā)的Annexin?V凋亡檢測試劑盒利用FITC標記的Annexin?V作為探針，檢測凋亡細胞膜外翻的磷脂酰絲氨酸。 |
?凋亡空泡(Apoptosis?Blebs)檢測試劑盒?/ ?產(chǎn)品編號:?600120 |
 ??圖.?A:?凋亡空泡(綠色)；B:?死細胞(紅色)；C:?凋亡空泡(綠色);?D:?細胞經(jīng)星孢菌素處理，從凋亡到死細胞(橙色) |
Cayman開發(fā)的凋亡空泡(Apoptosis?Blebs)檢測試劑盒，?利用一個抗體單鏈可變片段的重組蛋白來進行檢測，該抗體偏好性結(jié)合凋亡細胞膜空泡的自身抗原。該重組蛋白與蛋白A融合，再通過熒光標記的兔IgG進行檢測。 |
??自噬/細胞毒性雙染試劑盒?/ ?產(chǎn)品編號：?600140 |
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圖.?他莫昔芬(Tamoxifen)提高HepG2細胞自噬水平。?A:?HepG2細胞經(jīng)Vehicle處理,?MDC染色(對照)；B：HepG2細胞經(jīng)Vehicle處理,?PI染色(對照);?C：HepG2細胞經(jīng)10uM的Tamoxifen,?MDC染色；D:?HepG2細胞經(jīng)10uM的Tamoxifen,?PI染色結(jié)果。 | Cayman提供的自噬/細胞毒性雙染試劑盒是在細胞水平研究細胞自噬和細胞毒性調(diào)控的便捷工具，試劑盒利用甲丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,?MDC)自發(fā)熒光,?標記培養(yǎng)細胞的自噬泡結(jié)構(gòu)。 |
??Caspase-3熒光檢測試劑盒?/ ?產(chǎn)品編號: 10009135 |
? | Caspase?(Cysteine-requiring?Aspartate?Protease)是一個在細胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase?3也稱CPP32，Yama或apopain，有時被寫作caspase-3或caspase3，屬于caspase家族的CED-3亞家族?(CED-3?subfamily)，是細胞凋亡過程中的一個關(guān)鍵酶。?Caspase?3是哺乳動物細胞中研究最多的一個caspase酶。?Cayman研發(fā)的此款試劑盒利用Caspase-3催化其特異性底物?N-Ac-DEVD-N’-MC-R110，?產(chǎn)生高強度熒光產(chǎn)物，可在485nm下被激發(fā)，發(fā)射光為535nm。同時，試劑盒也提供有活性的Caspase-3作為陽性對照。 |
| ?細胞周期時相?(Cell?Cycle?Phase)?檢測試劑盒 ?/ ?產(chǎn)品編號: 10009349 |
| Cayman提供的此款細胞周期時相檢測試劑盒，可用于研究懸浮細胞樣本中細胞周期進程的誘導和抑制。實驗中涉及細胞的固定和破膜處理，可實現(xiàn)在完整細胞中利用PI對其DNA進行染色。 |
| 編號 | 名稱 | 規(guī)格 | 保存 | | 10009957 | Propidium?Iodide?Reagent,powder | 1?vial/1mg | 4℃ | | 10009322 | Cell-Based?Assay?Buffer?Tablet | 2Tablets | Room?Temperature | | 10009959 | Rnase?A?Solution | 1?vial/1ml | -20℃ | | 10009960 | CellCycle?Phase?Determination?Fixative | 1?vial/100ml | Room?Temperature
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??CFSE細胞分裂檢測試劑盒??/ ??產(chǎn)品編號: 10009853 |
 圖.?人外周血淋巴細胞增殖。A-C:?CFSE標記的淋巴細胞（Day0,?Day3,?Day6） | CFDA?SE的全稱為羧基二乙酸熒光素琥珀酰亞胺酯(Carboxyfluorescein?diacetate,?succinimidyl?ester)。CFDA?SE可以通透細胞膜，進入細胞后可以被細胞內(nèi)的酯酶(esterase)催化分解成CFSE，并保留于細胞內(nèi)。?由于CFDA?SE標記細胞的熒光非常均勻和穩(wěn)定，每分裂一次子代細胞的熒光會減弱一半，這樣通過流式細胞儀檢測就可以檢測出沒有分裂的細胞，分裂一次的細胞(1/2的熒光強度)，分離兩次的細胞(1/4的熒光強度)，分裂三次的細胞(1/8的熒光強度)以及類似的其它分裂次數(shù)的細胞。在熒光減弱到未染色細胞的背景信號前，可檢測分裂達8次的細胞。 |
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?JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒? / ??產(chǎn)品編號: 10009172 |
 | JC-1是一種廣泛用于檢測線粒體膜電位(mitochondrial?membrane?potential)??Ψm?的理想熒光探針?？梢詸z測細胞、組織或純化的線粒體膜電位。JC-1有單體和多聚體兩種存在狀態(tài)，在低濃度時以單體的形式存在，高濃度時以多聚體形式存在，兩者的發(fā)射光譜不同。在線粒體膜電位較高時，JC-1聚集在線粒體的基質(zhì)(matrix)中，形成聚合物?(J-aggregates)，可以產(chǎn)生紅色熒光；在線粒體膜電位較低時，JC-1不能聚集在線粒體的基質(zhì)中，此時JC-1為單體(monomer)，可以產(chǎn)生綠色熒光。?因此可方便地通過熒光顏色的轉(zhuǎn)變來檢測線粒體膜電位的變化。常用紅綠熒光的相對比例來衡量線粒體去極化的比例。通過JC-1從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變可以很容易地檢測到細胞膜電位的下降，同時也可用JC-1從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變作為細胞凋亡早期的一個檢測指標。 ?圖.?星形孢菌素(staurosporine)對Jurkat細胞線粒體膜電位的影響。A：?未經(jīng)星形孢菌素處理的細胞大多數(shù)具J-聚合物(紅色)；B:?經(jīng)星形孢菌素處理的細胞由于線粒體膜低電位，而被染成綠色。 |
??LDH細胞毒性檢測試劑盒?? / ?產(chǎn)品編號: 10008882 |
 | LDH是一種可溶性的胞漿酶，在細胞凋亡或壞死導致細胞膜完整性喪失時，LDH從胞漿釋放至細胞培養(yǎng)基中。因此，LDH的活性作為細胞膜完整性的一個檢測指標，通常也作為評估化學物質(zhì)或環(huán)境毒性因子的細胞毒性的檢測方法。Cayman提供的LDH細胞毒性檢測試劑盒可用于檢測細胞培養(yǎng)基中LDH的活性，通過兩步反應，產(chǎn)生有色產(chǎn)物-甲臢(formazan),?吸光度490-520nm。 |
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?多參數(shù)(Multi-Parameter)凋亡檢測試劑盒??/ ?產(chǎn)品編號: 600330 |
圖.?星形孢菌素(staurosporine)誘導Jurkat細胞凋亡，細胞核形態(tài)變化、線粒體膜電位降低以及Annexin?V-FITC標記的陽性細胞升高。圖A-C為對照，圖D-F為星形孢菌素處理。Hoechst染色顯示大多數(shù)對照細胞具有完整的圓形細胞核(A)，?而星形孢菌素處理的細胞則大多數(shù)呈濃縮、片段化的細胞核。TMRE染色顯示大多數(shù)對照細胞線粒體膜電位未受干擾(B)，?而星形孢菌素處理的細胞膜電位降低，未被染色。大多數(shù)對照細胞Annexin?V染色陰性(C)，而處理組細胞染色大多數(shù)呈陽性，表明細胞正經(jīng)歷凋亡 | Multi?Parameter?Apoptosis?Assay?kit聯(lián)合使用4種不同的試劑，同時檢測多種凋亡事件。該獨特的試劑盒利用FITC-Annexin?V結(jié)合物作為探針檢測質(zhì)膜不對稱性，用TMRE作為探針檢測線粒體膜電位，用7-AAD作為膜通透性/細胞活力指示劑，再用Hoechst染料展示細胞核形態(tài)。 |
?MTT細胞增殖檢測試劑盒? / ??產(chǎn)品編號: 10009365 |
 | Cayman提供的MTT細胞增殖檢測試劑盒可用于在任何體外模型中研究細胞增殖的誘導和抑制。也可用于篩選參與細胞周期調(diào)控的候選藥物。在實驗中，MTT被細胞攝入，經(jīng)胞內(nèi)NAD(P)H-氧化還原酶催化還原為甲臢(formazan)?。該實驗可在3-4個小時內(nèi)完成，無需洗滌步驟。 |
??WST-1細胞增殖檢測試劑盒? / ?產(chǎn)品編號: 10008883 |
| WST-1是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan。細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。WST-1是MTT的一種升級替代產(chǎn)品，和MTT或其它MTT類似產(chǎn)品如XTT、MTS等相比有明顯的優(yōu)點。試劑盒也可用于篩選參與細胞周期調(diào)控的候選藥物。 |
??WST-8細胞增殖檢測試劑盒? / ??產(chǎn)品編號: 10010199 |
? | WST-8?(2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)，在電子耦合試劑1-Methoxy?PMS存在的情況下能夠被還原成橙黃色水溶性的formazan。WST-8被細胞內(nèi)脫氫酶生物還原后生成的formazan能夠溶解在組織培養(yǎng)基中，生成的formazan量與活細胞數(shù)量成正比。實驗的靈敏度比其它四唑鹽如MTT,?XTT,?MTS或WST?-1高。由于WST-8相當穩(wěn)定，并且對細胞沒有毒性，可直接加入到細胞樣品中長時間孵育。 |
??XTT細胞增殖檢測試劑盒? / ?產(chǎn)品編號: 10010200? |
? | XTT化學名:2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)?carbonyl]?-2H-tetrazolium?hydroxide，作為線粒體脫氫酶的作用底物，被活細胞還原成水溶性的橙黃色產(chǎn)物formazan。當XTT與電子偶合劑（例如PMS）聯(lián)合應用時，其所產(chǎn)生的水溶性的formazan產(chǎn)物的吸光度與活細胞的數(shù)量成正比。檢測快速、靈敏度高，甚至可以測定較低細胞密度，重復性優(yōu)于MTT。試劑盒也可用于篩選參與細胞周期調(diào)控的候選藥物。 |
??Perfecta?3D?培養(yǎng)細胞活力檢測試劑盒 ?/ ?產(chǎn)品編號: 600990 |
?Cayman研發(fā)的此款?3D?培養(yǎng)細胞活力檢測試劑盒是基于3D?Biomatrix公司的細胞培養(yǎng)平臺。?Perfecta3D?懸滴板是一個新的三維細胞培
?養(yǎng)平臺，能夠在多孔板模式中形成大小均勻的球狀體懸滴；這種懸滴是細胞自組裝形成的球狀細胞簇，是三維（3D）細胞培養(yǎng)和篩選中研
?究的最有利的模型之一。同其他類型的3D支架和水凝膠等方法相比，這種球狀體具有簡單性，可重復性以及生理組織的相似性，能模擬組
?織腫瘤固有的代謝（氧氣、二氧化碳、養(yǎng)分、廢物）和增殖梯度變化。作為優(yōu)良的生理腫瘤模型可以提供比2D細胞培養(yǎng)更可靠的結(jié)果。細
?胞增殖檢測通過檢測WST-1還原為formazan的反應。 |
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