如何避免活細(xì)胞成像中的光漂白

2021-05-14

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? 如何避免活細(xì)胞成像中的光漂白

●如何避免活細(xì)胞成像中的光漂白

光漂白，即光照條件下導(dǎo)致的熒光基團(tuán)降解，其在活細(xì)胞成像中是一個(gè)非常嚴(yán)重的問(wèn)題。在活細(xì)胞成像中使用高強(qiáng)度激發(fā)光可降低熒光基團(tuán)發(fā)射熒光強(qiáng)度，甚至使其完全發(fā)射不出熒光。不過(guò)，這個(gè)問(wèn)題是可以解決的。目前，在不影響細(xì)胞活性的前提下，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)了幾種可以保護(hù)熒光蛋白和熒光染料所發(fā)的熒光不發(fā)生衰減并能保持熒光信號(hào)強(qiáng)度的方法。

●怎樣減少熒光漂白現(xiàn)象呢？

在進(jìn)行活細(xì)胞成像時(shí)，可以采取以下幾種方式減少光漂白現(xiàn)象的發(fā)生。GE醫(yī)療集團(tuán)，細(xì)胞分析-基因組學(xué)研究領(lǐng)域產(chǎn)品支持和應(yīng)用領(lǐng)導(dǎo)者Leanna Ferrand給出了如下幾個(gè)建議：

1、使用與熒光顯微鏡的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)相匹配的熒光染料和熒光蛋白進(jìn)行細(xì)胞成像；

2、盡可能降低激發(fā)光的強(qiáng)度，減少曝光時(shí)間；

3、避免長(zhǎng)時(shí)間將樣品暴露在“無(wú)用”的光照條件下，例如在沒(méi)有收集數(shù)據(jù)時(shí)在鏡下長(zhǎng)時(shí)間觀察等；

4、當(dāng)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，要仔細(xì)考慮所有的實(shí)驗(yàn)參數(shù)，收集足夠多的信息來(lái)回答研究的問(wèn)題即可，不要浪費(fèi)時(shí)間在其他因素上。你考慮的參數(shù)包括整個(gè)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行時(shí)間、實(shí)驗(yàn)進(jìn)行期間的拍照頻率、每次拍照使用的熒光通道數(shù)量、Z堆棧高度等；

注意，如果研究者拍照時(shí)間越長(zhǎng)，那么考慮上述四個(gè)參數(shù)應(yīng)該越嚴(yán)格，這樣才能確保在實(shí)驗(yàn)中觀察到正確的細(xì)胞活動(dòng)，而不是熒光漂白或者光毒性現(xiàn)象。

●Oxyrase公司的銷售市場(chǎng)經(jīng)理Lisa Stewart同時(shí)也建議：

1、當(dāng)進(jìn)行觀察時(shí)，使用中性密度濾光片來(lái)減少過(guò)多的曝光；

2、盡量選擇對(duì)光不敏感的染料進(jìn)行染色。

●使用減少光漂白的試劑

目前，市場(chǎng)上有一些公司可以提供專門用于活細(xì)胞成像實(shí)驗(yàn)中增強(qiáng)活細(xì)胞成像研究的試劑，比如Vector Laboratories公司的VectaCellTM Trolox 抗熒光淬滅劑。Vector Laboratories市場(chǎng)總監(jiān)Melissa Rebar博士指出，抗熒光淬滅劑通常用于固定樣品的成像。由于普通的抗熒光淬滅劑與活細(xì)胞不相容性，其不能用于活細(xì)胞的成像實(shí)驗(yàn)。

Vector Laboratories公司的VectaCell^TM?Trolox 抗熒光淬滅劑是專門用于活細(xì)胞成像實(shí)驗(yàn)使用的抗熒光淬滅劑，該試劑能保持熒光信號(hào)強(qiáng)度和時(shí)間。并可以保持熒光蛋白或細(xì)胞染料在活細(xì)胞成像中對(duì)光漂白現(xiàn)象的敏感性。

VectaCell^TM?Trolox抗淬滅試劑是一種穩(wěn)定的水溶性的維他命E的形式，該試劑抗光漂白和抗頻閃的性能是由于Trolox和其氧化形式Trolox-醌的聯(lián)合作用。這種氧化還原體系能高效對(duì)抗不同的活性氧，比如單質(zhì)氧，超氧化物陰離子或者過(guò)氧化氫。Rebar博士指出，Trolox這種物質(zhì)對(duì)多種細(xì)胞均具有保護(hù)作用，并呈現(xiàn)低毒性。

因?yàn)閂ectaCell^TM?Trolox抗淬滅劑是一種抗氧化劑，這種試劑的最佳工作濃度依賴于細(xì)胞類型以及細(xì)胞對(duì)低氧環(huán)境的耐受度。研究者在使用時(shí)需要對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行一些優(yōu)化。

●產(chǎn)品列表