Funakoshi新產(chǎn)品----AllView PAGE Buffer

2021-04-29

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AllView PAGE Buffer是一種新型的SDS-PAGE蛋白電泳緩沖液。這款緩沖液具有一個(gè)顯著的特點(diǎn)就是能夠在堿性的Laemmli凝膠（Tris-HCl）中分離不同分子量大小的蛋白質(zhì)，類似于“梯度凝膠”的使用。建議使用丙烯酰胺濃度為6%的分離膠和3%的濃縮膠，以分離分子量約在10 kDa至250 kDa的范圍的蛋白。電泳后的聚丙烯酰胺凝膠可直接用于CBB染色、銀染或western印跡。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 節(jié)省成本和時(shí)間（不需要梯度凝膠）

2. 使用mini?gel只需13分鐘即可完成電泳

3. 適用于之后進(jìn)一步的分析實(shí)驗(yàn):例如CBB染色、蛋白質(zhì)印跡等

操作步驟：

1. 用超純水將20×的AllView PAGE Buffer稀釋至1×工作液。（例如，取25 ml的AllView PAGE Buffer到475 ml 的超純水中.）

2. 將凝膠放入電泳槽中。

3. 將1×AllView PAGE Buffer注入電泳槽中。

4. 點(diǎn)樣以及加入蛋白marker

5. 開(kāi)始電泳，電泳條件設(shè)置如下。

Gel	Voltage	Time
Mini gel (8 × 10 cm, 1 mm thick)	250 V (Constant voltage)	13-15 min

注意：

AllView PAGE Buffer適用于Laemmli凝膠（見(jiàn)下文“推薦用法”）。

如果使用預(yù)制凝膠，則最佳丙烯酰胺濃度可能不同。

AllView PAGE Buffer不可重復(fù)使用。

AllView PAGE Buffer是20×原液。使用前請(qǐng)稀釋至1倍工作液。

如果觀察到SDS沉淀，使用前將其放在水?。s37°C）中使其完全溶解。

最佳電泳時(shí)間取決于丙烯酰胺濃度、凝膠大小和電壓。

建議使用MW Marker作為標(biāo)記。(e.g. DynaMarker? Protein MultiColor Stable II, Code#DM660).

推薦用法：

建議丙烯酰胺的濃度為6%的分離膠和3%的濃縮膠，以分離分子量大概10 kDa至250 kDa范圍的蛋白。特別是在需要分離低分子量蛋白質(zhì)（10kda~30kda）的情況下，建議使用10%的分離膠。

1. 準(zhǔn)備膠 (Laemmli’s method) ?

表1，聚丙烯酰胺分離膠和濃縮膠配方（2 mini gels）

	Stacking gel (6 ml)	Resolving gel (15 ml)
Gel percentage	3%	6%	10%
Ultrapure water	3.9 ml	8.05	6.05
1.5M Tris-HCl (pH8.8)	1.5	3.75	3.75
30% Acrylamide/Bis solution	0.6	3.0	5.0
10% SDS	0.06	0.15	0.15
TEMED	0.003 (3 μl)	0.00375 (3.75 μl)	0.00375(3.75 μl)
10% APS	0.06	0.05	0.05

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上圖為 DynaMarker^? Protein MultiColor Stable II, Code#DM660

2.電泳圖

AllView PAGE Buffer與Laemmli electrophoresis running buffer（Tris-Glycine-SDS）的使用區(qū)別在于蛋白質(zhì)遷移率不同。通過(guò)對(duì)AllView PAGE Buffer和Laemmli gel（Tris-HCl）的結(jié)合使用，可以像梯度凝膠一樣分離大范圍的蛋白質(zhì)大小，如下圖。

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