越來(lái)越多的證據(jù)表明，核小體是體外表征許多染色質(zhì)調(diào)節(jié)因子的最佳底物。隨著攜帶完全確定組蛋白修飾的重組核小體的出現(xiàn)，為下一代染色質(zhì)研究提供了新的或更好的方法(如染色質(zhì)結(jié)合蛋白分析、酶分析、抗體譜分析)。EpiCypher擁有令人印象深刻的產(chǎn)品目錄，其中包括83個(gè)獨(dú)特的重組核小體庫(kù)存，并且有能力生產(chǎn)定制設(shè)計(jì)核小體，質(zhì)量高、周期短，助力您的研究！
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在科研實(shí)驗(yàn)中，如果您要使用重組核小體進(jìn)行染色質(zhì)實(shí)驗(yàn)，則需考慮以下幾點(diǎn)：
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1、用于開(kāi)發(fā)修飾組蛋白的方法。確保使用無(wú)疤痕方法整合所需的PTMs是很重要的，這種方法可以重現(xiàn)天然組蛋白結(jié)構(gòu)。EpiCypher 使用幾種不同的方法獲得修飾的組蛋白，所有方法都會(huì)無(wú)疤痕整合組蛋白修飾。
為什么這很重要呢？許多市售的重組核小體是使用組蛋白PTM類似物構(gòu)建的，如甲基賴氨酸類似物(MLAs) 10，其會(huì)導(dǎo)致修飾位點(diǎn)的氨基酸序列發(fā)生變化。這些非天然組蛋白修飾類似物已被證明會(huì)破壞與染色質(zhì)調(diào)節(jié)蛋白和組蛋白PTM特異性抗體的相互作用，并且這對(duì)研究生理機(jī)制來(lái)講是不理想的。因此，使用這些方法合成的核小體時(shí)應(yīng)格外謹(jǐn)慎11-13。
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2、修飾組蛋白的純度。組裝完全定義的同質(zhì)核小體的下一步是對(duì)修飾組蛋白進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制。
在質(zhì)控結(jié)果中，HPLC 跡線應(yīng)顯示是單一洗脫物質(zhì)，表明組蛋白純度>95%；平行高分辨率質(zhì)譜（HRMS）應(yīng)在預(yù)期質(zhì)量的1道爾頓范圍內(nèi)顯示一個(gè)單峰，沒(méi)有任何意義的額外電荷質(zhì)量（m/z）信號(hào)（例如圖2A）。EpiCypher的所有修飾組蛋白均通過(guò)HPLC和HRMS分析進(jìn)行驗(yàn)證。
為什么這很重要呢？不必要的物質(zhì)（如甲硫氨酸氧化）可能引起結(jié)構(gòu)改變，并影響靜電相互作用或疏水相互作用，從而損害下游核小體組裝的效率。
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3、組裝核小體的質(zhì)量控制(QC)指標(biāo)。DNA組裝后核小體的質(zhì)量驗(yàn)證對(duì)最終產(chǎn)品的信任保證至關(guān)重要。?
EpiCypher使用天然PAGE分析DNA上的dNuc組裝，其中使用約150bp DNA的高效組裝應(yīng)該只產(chǎn)生單一物質(zhì)，這相對(duì)于未組裝的游離DNA，其遷移率降低(圖2B，下圖)。
為什么這很重要呢？因?yàn)楸晃廴镜挠坞xDNA會(huì)誘導(dǎo)染色質(zhì)修飾酶(如NSD2)的異?；钚裕员仨毐苊?。此外，次優(yōu)組裝可能導(dǎo)致樣品的異質(zhì)性混合，包括錯(cuò)誤定位的核小體。
我們還使用考馬斯染色對(duì)最終的dNucs進(jìn)行SDS-PAGE分析，以確保四種組蛋白的化學(xué)計(jì)量相等（圖2C，下圖）。然后，我們通過(guò)免疫印跡證實(shí)了整合組蛋白PTM的存在（圖2C，上圖）。
為什么這很重要呢？如果其他種類的蛋白質(zhì)污染或偏離1:1:1:1的比例，則可能表明組蛋白降解或組裝不良，因此有必要重新解析每個(gè)組蛋白。而免疫印跡對(duì)于確定修飾是否存在于組蛋白的正確位置上非常重要。
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核小體相關(guān)產(chǎn)品
分類 | 貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 |
rNucs Human Recombinant? Nucleosomes, No PTMs | 16-0006 | Mononucleosomes, biotinylated |
16-0009 | Mononucleosomes, non-biotinylated |
16-0024 | Mononucleosomes, desthiobiotinylated |
16-0027 | Tailless Nucleosomes, biotinylated |
16-0023 | Mononucleosomes, H3.1 ΔN2, biotinylated |
16-0016 | Mononucleosomes, H3.1 ΔN32, biotinylated |
16-1016 | Mononucleosomes, H3.1 ΔN32, non-biotinylated |
16-0017 | Mononucleosomes, H3.3 ΔN32, biotinylated |
16-1017 | Mononucleosomes, H3.3 ΔN32, non-biotinylated |
16-0018 | Mononucleosomes, H4 ΔN15, biotinylated |
16-3004 | Dinucleosomes, biotinylated |
16-3104 | Dinucleosomes, non-biotinylated |
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dNucs Designer Recombinant? Nucleosomes with PTMs | 16-0321 | H3K4me1, biotinylated |
16-0334 | H3K4me2, biotinylated |
16-1334 | H3K4me2, non-biotinylated |
16-0316 | H3K4me3, biotinylated |
16-1316 | H3K4me3, non-biotinylated |
16-0402 | H3K4,K9me3, biotinylated |
16-0403 | H3K4,K27me3, biotinylated |
16-0335 | H3K4me3,K9,14,18ac, biotinylated |
16-0325 | H3K9me1, biotinylated |
16-0324 | H3K9me2, biotinylated |
16-0315 | H3K9me3, biotinylated |
16-0338 | H3K27me1, biotinylated |
16-0339 | H3K27me2, biotinylated |
16-0317 | H3K27me3, biotinylated |
16-1317 | H3K27me3, non-biotinylated |
16-0397 | H3.1K27me3,S28phos, biotinylated |
16-0322 | H3K36me1, biotinylated |
16-0319 | H3K36me2, biotinylated |
16-0320 | H3K36me3, biotinylated |
16-1320 | H3K36me3, non-biotinylated |
16-0390 | H3.3K36me3, biotinylated |
16-0367 | H3K79me1, biotinylated |
16-0368 | H3K79me2, biotinylated |
16-0369 | H3K79me3, biotinylated |
16-0393 | H4K12me1, biotinylated |
16-0331 | H4K20me1, biotinylated |
16-0332 | H4K20me2, biotinylated |
16-0333 | H4K20me3, biotinylated |
16-1333 | H4K20me3, non-biotinylated |
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vNucs Histone Variants | 16-0013 | H2AX, biotinylated |
16-1013 | H2AX, non-biotinylated |
16-0366 | H2AXS139phos, biotinylated |
16-0014 | H2AZ.1, biotinylated |
16-1014 | H2AZ.1, non-biotinylated |
16-0015 | H2AZ.2, biotinylated |
16-0011 | H3.3, biotinylated |
16-0012 | H3.3, non-biotinylated |
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Mutant Nucs Defined Amino? Acid Substitutions | 16-0029 | H2AE61A, biotinylated |
16-1029 | H2AE61A, non-biotinylated |
16-0030 | H2AE92K, biotinylated |
16-1030 | H2AE92K, non-biotinylated |
16-0031 | H2BE105A,E113A, biotinylated |
16-1031 | H2BE105A,E113A, non-biotinylated |
16-0349 | Oncogenic Nucs (oncoNucs) |
16-0350 | H3.3K9M, biotinylated |
16-1323 | H3.3K27M, biotinylated |
16-0323 | H3.3K27M, non-biotinylated |
16-0346 | H3.3G34R, biotinylated |
16-0347 | H3.3G34V, biotinylated |
16-0348 | H3.3G34W, biotinylated |
16-0344 | H3.3K36M, biotinylated |
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Methyl DNA Nucs Nucleosomes? with Methylated DNA | 16-2043 | Mononucleosomes, Recombinant,? Hemi-methylated 199x601 DNA, biotinylated |
16-2143 | Mononucleosomes, Recombinant,? Hemi-methylated 199x601 DNA, non-biotinylated |
16-2044 | Mononucleosomes, Recombinant,? 199x601 DNA, biotinylated |
16-2144 | Mononucleosomes, Recombinant,? 199x601 DNA, non-biotinylated |
16-2045 | Mononucleosomes, Recombinant, Symmetrically? Methylated 199x601 DNA, biotinylated |
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EpiDyne??Chromatin Remodeling? Assay Substrates | 16-4201 | EpiDyne FRET Nucleosome Remodeling? Assay Substrate |
16-4101 | EpiDyne Nucleosome Remodeling Assay? Substrate ST601-GATC1 |
16-4112 | EpiDyne Nucleosome Remodeling Assay? Substrate ST601-GATC1,2, biotinylated |
16-4113 | EpiDyne Nucleosome Remodeling Assay? Substrate ST601-GATC1,2,3, biotinylated |
16-4114 | EpiDyne Nucleosome Remodeling Assay? Substrate ST601-GATC1, 50-N-66, biotinylated |
16-4115 | EpiDyne Nucleosome Remodeling Assay? Substrate ST601-GATC1,2, 50-N-66, biotinylated |
16-4116 | EpiDyne Nucleosome Remodeling Assay? Substrate ST601-GATC1,2,3, 50-N-66, biotinylated |
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SNAP Spike-in Controls | 19-1002 | SNAP-CUTANA? K-MetStat Panel |
19-1001 | SNAP-ChIP K-MetStat Panel |
19-2001 | SNAP-ChIP OncoStat Panel |
19-3001 | SNAP-ChIP K-AcylStat Panel |
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dCypher? Nucleosome Panels | 16-9001 | dCypher? Nucleosome Full Panel |
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想了解更多關(guān)于EpiCypher重組核小體技術(shù)和產(chǎn)品的信息嗎？請(qǐng)聯(lián)系欣博盛！
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關(guān)于EpiCypher公司：
EpiCypher是一家成立于2012年的表觀遺傳學(xué)公司。從專有組蛋白肽陣列平臺(tái)EpiGold?開(kāi)始，EpiCypher開(kāi)發(fā)了一系列同類產(chǎn)品。同時(shí)，EpiCypher是重組核小體制造和開(kāi)發(fā)的全球領(lǐng)導(dǎo)者。利用其獨(dú)有技術(shù)，不斷增加產(chǎn)品庫(kù)中高純度修飾重組核小體（dNucs?）產(chǎn)品。dNuc?多樣性的產(chǎn)品為破譯組蛋白編碼和加速藥物開(kāi)發(fā)提供了強(qiáng)大的工具。
EpiCypher還將dNuc?技術(shù)廣泛的應(yīng)用于多種分析測(cè)定產(chǎn)品中，包括：SNAP-ChIP??Spike-in Controls（用于抗體分析和ChIP定量）， EpiDyne??底物（用于染色質(zhì)重塑和抑制劑篩選及開(kāi)發(fā)），dCyher?測(cè)定（用于探究表觀遺傳蛋白質(zhì)-組蛋白PTM結(jié)合相互作用）。最近，EpiCypher還推出了針對(duì)ChIC、CUT&RUN和CUT&Tag的高靈敏度表觀基因組圖譜CUTANA?分析。
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