相對(duì)于傳統(tǒng)SDS-PAGE制膠工藝，Merck公司的mPAGE??Lux制膠系統(tǒng)是一種更快速、簡(jiǎn)單、安全的替代方法，可實(shí)現(xiàn)更具可重現(xiàn)性的結(jié)果。mPAGE??Lux制膠系統(tǒng)可在90秒內(nèi)完成小型凝膠固化，而傳統(tǒng)方法則需要90分鐘以上。該系統(tǒng)采用紫外線照射快速制膠工作流程，加速mPAGE??Lux Bis-Tris試劑固化——Bis-Tris凝膠化學(xué)試劑相對(duì)于傳統(tǒng)方法可縮短跑膠時(shí)間。
這種一步法光聚合工藝采用精密的系統(tǒng)控制，人為出錯(cuò)的概率更低。mPAGE??制膠器可防止?jié)B漏，選用的Bis-Tris凝膠比人工制備的Tris-Glycine凝膠條帶質(zhì)量更佳。此外，mPAGE??Lux試劑盒、mPAGE??TurboMix試劑盒和mPAGE??預(yù)制膠均使用Bis-Tris化學(xué)試劑，共用同一跑膠緩沖液和凝膠染色劑。mPAGE??Lux制膠系統(tǒng)不使用APS或TEMED，有毒化學(xué)品用量更小，是一種更安全的替代方法。
mPAGE??Lux工作流程
圖1.?傳統(tǒng)制膠工作流程與mPAGE??Lux對(duì)比。相對(duì)于傳統(tǒng)制膠技術(shù)，mPAGE??Lux制膠系統(tǒng)總步驟更少、聚合時(shí)間更短、有毒廢棄物更少。mPAGE??Lux制膠系統(tǒng)制得的凝膠兼容mPAGE??小型膠槽和Bio-Rad Mini-PROTEAN電泳槽。為實(shí)現(xiàn)非凡的分離度并縮短跑膠時(shí)間，請(qǐng)使用mPAGE??緩沖液。Lux凝膠兼容Bis-Tris適用的緩沖液和染色試劑。
圖2.?mPAGE??Lux Bis-Tris凝膠和手制tris-甘氨酸凝膠的數(shù)據(jù)質(zhì)量對(duì)比。mPAGE??Lux Bis-Tris凝膠（左）和手制tris-甘氨酸凝膠（右）的條帶質(zhì)量對(duì)比。兩種凝膠都是10%丙烯酰胺，上樣A431人類細(xì)胞裂解物滴定液。電泳運(yùn)行時(shí)間200V 下為 42 分鐘（Lux 凝膠），120V 下為119分鐘（tris-甘氨酸凝膠）。凝膠采用ReadyBlue?考馬斯凝膠染色劑染色。
圖3.?濕法、快速和半干法轉(zhuǎn)印方法蛋白質(zhì)印跡對(duì)比。對(duì)比采用12% mPAGE??Lux Bis-Tris凝膠，上樣A431人細(xì)胞裂解物滴定液，通過各種轉(zhuǎn)印方法轉(zhuǎn)印到Immobilon??-P膜上。使用抗EGFR和抗ErK1/2 抗體轉(zhuǎn)印膜，然后使用Immobilon??ECL Ultra Western HRP底物進(jìn)行檢測(cè)。Turbo 方法 = 使用Bio-Rad Trans-Blot??Turbo?轉(zhuǎn)印系統(tǒng)和Trans-Blot??Turbo?轉(zhuǎn)印套裝進(jìn)行轉(zhuǎn)印。
圖4.?mPAGE??Lux Bis-Tris凝膠的重現(xiàn)性。A. 制備四份8%凝膠并上樣A341人細(xì)胞裂解物滴定液，隨后用ReadyBlue?考馬斯凝膠染色劑染色。B. 計(jì)算每份凝膠未染色分子量標(biāo)記的相對(duì)遷移距離 (Rf)。揭示每個(gè)蛋白質(zhì)條帶的標(biāo)準(zhǔn)偏差。
圖5.?mPAGE??Lux Bis-Tris試劑保質(zhì)期分析。mPAGE??Lux Bis-Tris制膠使用試劑(A)?0 個(gè)月、(B) 6個(gè)月或(C) 12 個(gè)月。運(yùn)行模式或運(yùn)行時(shí)間上未觀測(cè)到差異。
mPAGE??Lux制膠系統(tǒng)為您提供了創(chuàng)新的制膠工藝解決方案。您無須再在節(jié)省時(shí)間和節(jié)省資源方面作出取舍。全新的制膠系統(tǒng)讓研究人員可根據(jù)需要輕松快速制備凝膠，同時(shí)成本僅相當(dāng)于預(yù)制膠技術(shù)的幾分之一。通過mPAGE??Lux制膠系統(tǒng)，可提高實(shí)驗(yàn)室效率并升級(jí)凝膠電泳工作流程。
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