目前檢測microRNAs的挑戰(zhàn)是通常兩個(gè)傳統(tǒng)的PCR引物不適合miRNA目標(biāo)，因?yàn)橐锏慕M合長度幾乎是microRNAs長度的兩倍。現(xiàn)有的技術(shù)通過使用例如發(fā)夾引物，添加polyA尾，或通過連接添加片段延伸微microRNAs已經(jīng)解決了這個(gè)問題，然而，這些方法缺損害了檢測的靈敏度和特異性。此外，這些方法不能檢測在3’端修飾的microRNAs，因?yàn)闀?huì)干擾延伸過程。
BioVendor新推出檢測miRNA的Two-Tailed RT-qPCR方法提供了一個(gè)優(yōu)越的解決方案。Two-Tailed RT-qPCR不是使用單一的結(jié)合探針，而是使用兩個(gè)半探針（hemiprobes），它們結(jié)合到microRNA的不同片段，并通過折疊的系繩連接。雖然每一個(gè)半探針都太短而不能結(jié)合microRNA，但當(dāng)兩者互補(bǔ)時(shí)，它們就會(huì)協(xié)同結(jié)合。
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圖1. Two-Tailed RT-qPCR檢測原理
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● Two-Tailed RT-qPCR檢測優(yōu)勢：
1. 引物結(jié)合特異性強(qiáng)
2. 形成cDNA后可以使用2個(gè)序列特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增
3. SYBR以及水解探針均可以使用
4. 適用一管多色以及單色qPCR后的雙管多色的反轉(zhuǎn)錄
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●?產(chǎn)品列表
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
RDTTRT50 | Two-Tailed cDNA Synthesis System 50 rxn | 50 rxn |
RDTTPCR150 | Two-Tailed qPCR Master Mix 150 rxn | 150 rxn |
RDTT000****PRI | Two-Tailed RT/ PCR Primers | 50 rxn/ 150 rxn |
****代表不同miRNA名稱編號(hào)
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