StressMarq——Alpha 突觸核蛋白產(chǎn)品推薦（3）

Alpha 突觸核蛋白A53T 突變型PFF

Alpha 突觸核蛋白 A53T PFFs (目錄號 SPR-326) 在培養(yǎng)的原代大鼠神經(jīng)元中誘導絲氨酸 129 磷酸化

培養(yǎng)基中 1 μg/ml 超聲處理的 StressMarq’s Alpha 突觸核蛋白 A53T 突變 PFF（目錄號 SPR-326）可誘導原代大鼠神經(jīng)元中 Ser129 磷酸化。

來源: Associate Professor Rehana Leak,Duquesne University, USA

Alpha 突觸核蛋白寡聚體
與不溶性原纖維相比，寡聚體是小的（25-30 nm）球狀可溶結(jié)構(gòu)。它們是與帕金森病相關(guān)的有毒聚集體，在結(jié)構(gòu)上與原纖維不同。 負染色（鈾酰酸）的電子顯微鏡圖顯示了Alpha 突觸核蛋白的寡聚體結(jié)構(gòu)，左側(cè)為用多巴胺處理的alpha 突觸核蛋白寡聚體 (目錄號 SPR-466)，中間為EGCG處理的 (目錄號 SPR-469) ，右側(cè)為動態(tài)學穩(wěn)定的寡聚體 (目錄號 SPR-484).
來源: EM performed at U. of British Columbia	來源: EM performed at U. of British Columbia	來源: EM performed at University of Toront

Alpha 突觸核蛋白毒性
100 μg/ml 的各種 α-突觸核蛋白對原代小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元的毒性測試，一式四份： 孵育 24 小時后進行 MTT 測定（左）和 LDH 釋放測定（右）。
	寡聚體誘發(fā)的神經(jīng)元毒性明顯高于原纖維

來源: performed at QPS Austria GmbH

ATTO 594 標記的原纖維也有聚集活

ATTO594 標記的 (目錄號 SPR-322-A594) 人 1型 Alpha 突觸核蛋白PFF

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ATTO 594 標記不會顯著影響目錄號 SPR-322 的聚集能力

ATTO 594 PFF 誘發(fā)人神經(jīng)元中的病理現(xiàn)象

神經(jīng)元培養(yǎng)試劑盒: 預(yù)分化的混合神經(jīng)元 (血細胞iPSC;) 每孔4000個細胞。

細胞染色: 上: pSer129 α –syn 染色 (Alpha 突觸核蛋白抗體, StressMarq 目錄號 SMC-600), 綠色 中: ATTO 594 染色, 紅色 下: 以上兩者復(fù)合圖, 外加肌動蛋白 (粉色) 和DNA (藍色) 染色. 來源: ICC human iPSCs; CellState Biosciences, USA

與 Cellectricon (瑞典) 的合作項目

ATTO 標記的 PFF（目錄號 SPR-322-A594）被引入微流控系統(tǒng)的第 1 室

熒光標記的 α 突觸核蛋白原纖維 (目錄號 SPR-322-A594) 被第 1 室的神經(jīng)元攝取，并轉(zhuǎn)運到第 2 室的細胞體中，誘導 α 突觸核蛋白磷酸化。

ATTO-594 PFF 誘導大鼠腸神經(jīng)元中Alpha 突觸核蛋白聚集

Northeastern大學的研究人員使用 StressMarq 的 ATTO 594 標記的 Alpha 突觸核蛋白 PFF（目錄號 SPR-322-A594）來研究不同劑量下大鼠腸神經(jīng)元對熒光標記的 PFF的吸收和保留。將前體原纖維 PD 模型應(yīng)用于丁酸鹽和脂多糖的共同給藥組，以模擬局部腸道微生物組的影響。 ● 大鼠腸道和皮質(zhì)神經(jīng)元中 PFF 的攝取和保留具有顯著的劑量依賴性 ●?加入了PFF 的腸神經(jīng)系統(tǒng) (ENS) 培養(yǎng)物的生長錐形態(tài)發(fā)生變化 ●? ENS 克服了 PFF 劑量以保持穩(wěn)定的活性

(A) 理論上的前體原纖維 (PFF) 毒性進展的圖示，從 PFF 的引入到神經(jīng)元的攝取以及內(nèi)源 α-突觸核蛋白 (a-Syn) 的進一步聚集。 (B) 實驗設(shè)計的時間表。 在整個實驗期間，每 2-3 天喂養(yǎng)一次培養(yǎng)物。 (C) 為實驗分離出來的神經(jīng)元群（皮質(zhì)和腸）的代表性圖像，方框圈出的對應(yīng)的解剖位置。

來源: Bindas et al. https://doi.org/10.1038/s41598-022-26543-x

動態(tài)學穩(wěn)定的Alpha 突觸核蛋白寡聚體
動態(tài)學穩(wěn)定的alpha-突觸核蛋白寡聚體的電鏡圖 (目錄號 SPR-484)	(B)和(C)分別是凍融一次后的和37℃孵育兩周后的尺寸排阻色譜(SEC)。在峰值處，90%SPR-484在凍融后37℃下孵育兩周仍然穩(wěn)定于寡聚體狀態(tài)。
動態(tài)學穩(wěn)定的 Alpha 突觸核蛋白寡聚體 (目錄號 SPR-484) 穩(wěn)定于球狀的寡聚體結(jié)構(gòu)。
用對照 PBS 緩沖液處理后 11 天的原代大鼠多巴胺能神經(jīng)元（左）和用 10 μg/mL 目錄號 SPR-484 處理 11 天后的原代大鼠多巴胺能神經(jīng)元（右）。細胞核呈藍色 (Hoechst)，多巴胺能神經(jīng)元呈紅色 (MAP2)，病理現(xiàn)象呈綠色 (α-syn pSer129)。白色箭頭指出的是 MAP2 陽性神經(jīng)元中有明顯 pSer129 病理現(xiàn)象的幾個區(qū)域。
動態(tài)學穩(wěn)定的Alpha突觸核蛋白寡聚體 (目錄號 SPR-484) 誘發(fā)原代大鼠多巴胺能神經(jīng)元中的pSer129 病理現(xiàn)象

使用α 突觸核蛋白單體、PFF 和 動態(tài)學穩(wěn)定的寡聚體 開發(fā)的一種新型檢測方法

愛丁堡大學的研究人員與 StressMarq Biosciences 合作，使用 α 突觸核蛋白單體（目錄# SPR-321）、PFF（目錄# SPR-322）和動態(tài)學穩(wěn)定的寡聚體（目錄# SPR-484）開發(fā)了一種定量和表征聚集體的測定方法。這種新技術(shù)稱為單分子雙色聚集體下拉 ( STAPull )，可能是早期診斷中很有前景的工具，因為它能夠檢測皮摩爾級的寡聚體 α 突觸核蛋白，與單色檢測相比，靈敏度提高三倍。 ● 當兩種正交標記的檢測抗體靶向相同的表位時檢測到寡聚體，從而導致雙色共定位。 α突觸核蛋白單體產(chǎn)生單色信號。 ●?這種新穎的方法可檢測到動態(tài)學穩(wěn)定的寡聚體（目錄# SPR-484），這些寡聚體最有可能存在于帕金森病的最早階段。

STAPull檢測ThT陰性α- syn 寡聚體。 A) StressMarq 的人源重組 α-syn 的代表性SiMPull圖像，其呈單體、動態(tài)學穩(wěn)定的寡聚體或前體原纖維形式，如圖所示。ThT 檢測（頂部）或STAPull雙色重合（底部）呈現(xiàn)的是相同的視野，插圖是方框區(qū)域被放大。全視野比例尺為5 μm，插圖為2 μm。 B) ThT 斑點平均數(shù)的量化，C) (A) 中表示的數(shù)據(jù)集的每平方微米STAPull重合事件。 參考文獻： Saleeb ，R. 等人。 DOI： 10.1126/sciadv.adi7359

Tau-352 (胚胎 0N3R) & Alpha 突觸核蛋白共聚集體原纖維
Tau-352 和 Alpha 突觸核蛋白共聚體原纖維 （目錄號 SPR-494）的電鏡	胚胎 Tau-352 0N3R & Alpha 突觸核蛋白共聚集體原纖維的體外聚集硫磺素T檢測
來源: University of Toronto, Canada	來源: StressMarq Lab; internal results
StressMarq 的共聚體原纖維是將單體共孵育在一起之后形成的原纖維，所以該原纖維在單個原纖維中同時含有 Tau 和 Alpha 突觸核蛋白。 Tau 0N3R 和 Alpha 突觸核蛋白共聚集體原纖維 (目錄號 SPR-494) 在72小時內(nèi)既可以聚集 Alpha 突觸核蛋白單體，也可以聚集Alpha 突觸核蛋白和 Tau 0N3R 混合的單體。

Tau-441 (2N4R) & Alpha 突觸核蛋白共聚集體原纖維
Tau-441 和 Alpha 突觸核蛋白共聚集體原纖維 (目錄號 SPR-495) 的電鏡圖	Tau 2N4R & Alpha 突觸核蛋白共聚集體原纖維的體外聚集硫磺素T檢
來源: University of Toronto, Canada	來源: StressMarq Lab; internal results
StressMarq 的共聚體原纖維是將單體共孵育在一起之后形成的原纖維，所以該原纖維在單個原纖維中同時含有 Tau 和 Alpha 突觸核蛋白。 Tau 2N4R 和 Alpha 突觸核蛋白共聚集體原纖維 (目錄號 SPR-495) 在72小時內(nèi)既可以聚集 Alpha 突觸核蛋白單體，也可以聚集Alpha 突觸核蛋白和 Tau 2N4R 混合的單體。

Tau & Alpha 突觸核蛋白共聚集體原纖維的免疫-TEM

原纖維被吸附到碳涂層銅網(wǎng)格上。 6nm（asyn）和 12nm（tau）信號同時出現(xiàn)在共聚集體原纖維樣品的同一原纖維鏈中(目錄號 SPR-494, SPR-495)，并且在對照 α-突觸核蛋白或 tau 原纖維中未觀察到抗體交叉反應(yīng)。

網(wǎng)格用含1% BSA 和 0.1% Tween-20 的 PBS 封閉，洗滌，然后依次在封閉緩沖液中用 20 μg/mL 的一抗孵育，洗滌，再在封閉緩沖液中用 20 μg/mL 的二抗孵育，洗滌并用2% 乙酸雙氧鈾作為負染色。 一抗: 小鼠抗人asyn單克隆抗體（StressMarq SMC-532）和兔抗人tau多克隆抗體（StressMarq SPC-802）;? 二抗: 6nm 膠體金標記的山羊抗小鼠抗體 (Jackson ImmunoResearch 115-195-146) 和 12nm 膠體金標記的山羊抗兔抗體 (Jackson ImmunoResearch 115-195-146)。

StressMarq Alpha 突觸核蛋白發(fā)表文獻

人 Alpha 突觸核蛋白前體原纖維 (1型)，目錄號 SPR-322

Deciphering the role of hsp110 chaperones in diseases of protein misfolding.?Yakubu, U. M. (2021) PhD Thesis, University of Texas.

2. Suppression of aggregate and amyloid formation by a novel intrinsically disordered region in metazoan Hsp110 chaperones. Yakubu, U.M. Morano, K.A. (2021) J Biol Chem Jan-Jun 2021;296:100567.

3. Design, Synthesis and Chemically Engineered Graphene Quantum Dot Applications: Contrast Agent for MR Imaging and Targeted Therapeutics on Parkinson’s Treatment. Poonkuzhali, K. et al. (2022) SSRN 4056733.

4. Rational Generation of Monoclonal Antibodies Selective for Pathogenic Forms of Alpha-Synuclein. Gibbs, E. et al. (2022) Biomedicines 10,2168.?

5. LRP1 is a neuronal receptor for α-synuclein uptake and spread. Chen, K. et al. (2022) Molecular Neurodegeneration 17(1):57.?

6. Granulovacuolar degeneration bodies are independently induced by tau and α-synuclein pathology. Jorge-Oliva, M. et al. (2022) Alzheimer’s Research and Therapy (14)187.

7. Disrupting the α-synuclein- ESCRT interaction with a peptide inhibitor mitigates neurodegeneration in preclinical models of Parkinson’s disease. Nim, S. et al. (2023) Nat Commun 14, 2150.

8. a-Synuclein-dependent increases in PIP5K1γ drive inositol signaling to promote neurotoxicity. Horvath, J. D. et al. (2023) Cell Reports 42, 113244 (Also cited catalog# SPR-480 and SPR-487).

9. Immunization Effects of a Novel α-Synuclein-Based Peptide Epitope Vaccine in Parkinson’s Disease-Associated Pathology. Park, J.S. et al. (2023) Vaccines 11:1820.

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小鼠 Alpha 突觸核蛋白前體原纖維 (1型)，目錄號 SPR-324

The SUMO conjugase Ubc9 protects Dopaminergic cells from cytotoxicity and enhances the stability of α-synuclein in Parkinson’s disease models. Verma, D.K. et al. (2020) eNeuro 0134-20.2020.

Alpha-Synuclein Preformed Fibrils Induce Cellular Senescence in Parkinson’s Disease Models. Verma, D.K. et al. (2021) Cells 10, 1694.

Heat Shock Protein 70 as a Sex-Skewed Regulator of α-Synucleinopathy.Bhatia, T. N. et al.? (2021) Neurotherapeutics Oct;18(4):2541-2564.

Domain-Independent Inhibition of CBP/p300 Attenuates α-Synuclein Aggregation. Hlushchuk, I. et al. (2021) ACS Chemical Neuroscience Jul 7;12(13):2273-2279.

A Novel NOX Inhibitor Treatment Attenuates Parkinson’s Disease-Related Pathology in 小鼠 Models. Ghosh, A. A. et al. (2022) Int J Mol Sci 23, 4262.

Cell Culture Media, Unlike the Presence of Insulin, Affect α-Synuclein Aggregation in Dopaminergic Neurons. Hlushchuk, I. et al. (2022) Biomolecules 12, 563.

Targeted degradation of ?-synuclein aggregates in Parkinson’s disease using the AUTOTAC technology. Lee, J. et al. (2023) Mol Neurodegeneration?18, 41.

A Novel NOX Inhibitor Alleviates Parkinson’s Disease Pathology in PFF-Injected Mice. Ofori, K. et al. (2023) preprint.

Genetic and pharmacological reduction of CDK14 mitigates α-synuclein pathology in human neurons and in rodent models of Parkinson’s disease. Parmasad, J.L., et al. (2023) bioRxin preprint.

Identifying Novel Targets and Potential Therapeutics for Parkinson’s Disease. Gosh, A.A et al. (2023) PHD Thesis? Delaware State University.

11. Fluorescent Peptide-based Probe for the Detection of Alpha-synuclein Aggregates in the Gut. Sim, R. (2023) bioRxin preprint.

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人 Alpha 突觸核蛋白前體原纖維: ATTO-594 (1型)，目錄號 SPR-322-A594

Aggregation of alpha-synuclein in enteric neurons does not impact function in vitro. Bindas, A.J. et al. (2022) Sci Rep 12, 22211.

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人 Alpha 突觸核蛋白A53T 突變型前體原纖維 (1型)，目錄號 SPR-326

Environmental enrichment reduced pathological α-Synuclein accumulation by restoring LAMP1 via Reelin in early stage of Parkinson’s disease. Cho, E. (2021) PhD Thesis, Yonsei University.

Reelin Alleviates Mesenchymal Stem Cell Senescence and Reduces Pathological α-Synuclein Expression in an In Vitro Model of Parkinson’s Disease. Cho, E. (2021) Genes 12, 1066.

Reelin protects against pathological alpha-synuclein accumulation and dopaminergic neurodegeneration after environmental enrichment in Parkinson’s disease. Cho, E. et al. (2022) Neurobiology of Disease 175:105898.

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人 Alpha 突觸核蛋白前體原纖維 (2型),?目錄號 SPR-317

Directed Evolution of Antibodies Against Complex Targets. Desai, A. (2021) PhD Thesis, University of Michigan.

Observation of α-Synuclein Preformed Fibrils Interacting with SH-SY5Y Neuroblastoma Cell Membranes Using Scanning Ion Conductance Microscopy. Feng, C. et al. (2022) ACS Chemical Neuroscience. DOI: 101021/acschemneuro.2c00478.

Flow cytometric isolation of drug-like conformational antibodies specific for amyloid fibrils. Desai, A. et al.(2023) bioRxin preprint. (Also cited catalog# SPR-332, SPR-324 & SPR-484)

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人 Alpha 突觸核蛋白 A53T 突變型蛋白單體 (Type 1),?目錄號 SPR-325

Mutant a-synuclein propagates via the lymphatic system of the brain in the monomeric state. Fujita, K. et al. (2023) Cell Reports, 112962.

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人 Alpha 突觸核蛋白單體 (1型),?目錄號 SPR-321

Deciphering the role of hsp110 chaperones in diseases of protein misfolding. Yakubu, U. M. (2021) PhD Thesis, University of Texas.

Suppression of aggregate and amyloid formation by a novel intrinsically disordered region in metazoan Hsp110 chaperones. Yakubu, U.M., Morano, K.A. (2021) J Biol Chem Jan-Jun 2021;296:100567.

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人 Alpha 突觸核蛋白寡聚體 (動態(tài)學穩(wěn)定的),?目錄號 SPR-484

LRP1 is a neuronal receptor for α-synuclein uptake and spread. Chen, K. et al. (2022) Molecular Neurodegeneration 17(1):57.

其他相關(guān)產(chǎn)品：

StressMarq的 Alpha 突觸核蛋白抗體

總 結(jié)

● 多種α突觸核蛋白聚集體可誘發(fā)疾病

●?StressMarq 研發(fā)了一系列 α 突觸核蛋白，包括： 兩種類型的人源 α 突觸核蛋白 PFF； A53T 突變型原纖維； N-乙?；w維；小鼠和大鼠 PFF；未成熟的原纖維；動態(tài)學穩(wěn)定的寡聚體；鹽酸多巴胺穩(wěn)定的寡聚體、EGCG 穩(wěn)定寡聚體、tau 和 α 突觸核蛋白共聚集體原纖維

●?一些 PFF 由相同的起始單體原料制成，在 EM 下看起來形態(tài)相似，但它們是在不同的條件下聚集生產(chǎn)的PFF

●?不同的α突觸核蛋白形式具有明顯不同的神經(jīng)元和生理活性

●?單體、寡聚體、原纖維和纖絲α突觸核蛋白都與帕金森病有關(guān).

●?StressMarq 提供各種工具用于突觸核蛋白病研究

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