作為全球領先的核酸修飾專家,TriLink 的修飾性核苷酸在用于藥物研發(fā)的各種技術中也應用廣泛,SELEX技術便是其中之一。
SELEX,即指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進化技術(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment,SELEX),是一項用于篩選核酸適配體(Aptamer)的技術。核酸適配體,是可與蛋白質、金屬離子、小分子、多肽甚至整個細胞等目的靶標進行高親和力和特異性結合的一段寡核苷酸序列(DNA或RNA)。
與抗體相比,極性帶負電的核酸分子與蛋白結合時可以提供更多的氧原子,提供更多的電子對去產生更多的氫鍵,增加相互作用的鍵能,維持更穩(wěn)定的結構;另外,核酸適配體與抗體相比具有分子量小,穩(wěn)定性更好,易改造修飾,無免疫原性,制作周期短,可以通過人工合成等優(yōu)勢,免去了動物免疫、飼養(yǎng)、蛋白提取和純化等一系列流程。因此,核酸適配體相比抗體,在生化分析,生物醫(yī)療,新藥研發(fā)等方面都有更大的潛力。
SELEX流程:
1.?確定目的靶標。(目標分子可以是蛋白質,小分子或超分子結構,甚至細胞。)
2.?構建隨機寡核苷酸(~1 x 10?15個寡核苷酸)文庫。
3.?靶標與文庫核酸共孵育。
4.?去除未結合的核酸片段,而結合的那些片段進行擴增后,進行下一輪篩選。
5.?通過該過程,將與靶標有高親和力的寡核苷酸從數(shù)萬億的數(shù)量中篩選出來。
6.?對最終篩選出的適配體進行分類,純化、測序以及后期修飾。
適配體的后期修飾,可以使適配體更加穩(wěn)定性,并鞏固適配體與目的靶標的親和力,且進行了熒光等功能團修飾的適配體還可以用于檢測和固定目的靶標。Trilink的2'-Fluoro-dCTP(目錄號N-1008)和2'-Fluoro-dUTP(目錄號N-1010)就經常被用于適配體的修飾。這些修飾類型提高了適體的穩(wěn)定性,使其對核酸內切酶降解的抵抗力增強。
由SELEX衍生的PhotoSELEX技術使用5-溴-2'-脫氧尿苷-5'-三磷酸酯(Br-dU)(TriLink目錄號N-2008)代替標準的胸苷。除了通過空間構象與目的靶標結合,修飾適配體的Br-dU殘基和靶標的酪氨酸之間也存在共價鍵。Br-dU修飾的寡核苷酸暴露于輻射中時,處于正確構象的寡核苷酸與靶分子上的特定位點共價交聯(lián)。該技術可以實現(xiàn)蛋白質的高通量檢測。
SELEX只是修飾核苷酸的眾多應用之一。TriLink提供了可用于多種研究目的的修飾核苷酸。
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