當(dāng)我們做完ELISA實(shí)驗(yàn),測(cè)完吸光度,數(shù)據(jù)我們應(yīng)該怎么處理呢?標(biāo)準(zhǔn)曲線不是直線應(yīng)該怎么辦?本篇整理了ELISA數(shù)據(jù)處理相關(guān)的知識(shí),希望能幫助到您。
一、ELISA 標(biāo)準(zhǔn)曲線分析步驟
1.標(biāo)曲和樣本孔的每個(gè)孔 450nm 的OD值減去630nm(或570nm)的OD值;
2.再將獲得的標(biāo)曲和樣本孔數(shù)據(jù)分別減去空白孔Blank的OD值;
3.以標(biāo)曲的濃度為橫坐標(biāo),以上算出的OD值為縱坐標(biāo),擬合標(biāo)曲(選擇R2值大于0.99的比較好的擬合方式,必要時(shí)可以刪除個(gè)別差異較大的標(biāo)曲點(diǎn)進(jìn)行擬合);
4.計(jì)算樣本值,將樣本減去空白孔的OD值復(fù)制,選軟件中的“粘貼”,得到的X值再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)就是最終的濃度值。
二、ELISA 標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合方程
1.直線回歸:直線回歸是最基本、簡(jiǎn)單的回歸分析方法,將所有的測(cè)試點(diǎn)擬合為一條直線,其擬合函數(shù)方程式為:y = a + bx。一般實(shí)際實(shí)驗(yàn)中線性極好的情況下直線回歸可以獲得較為理想的R2值,如果直線擬合不理想,可以考慮三次曲線、logistic曲線(四參數(shù))等。
2.logistic曲線(四參數(shù))擬合回歸方程:競(jìng)爭(zhēng)法和夾心法都可以用到。它要求X值不能小于0(因?yàn)橹笖?shù)是實(shí)數(shù),故有此要求)。在很多情況下它都可以擬合ELISA的反應(yīng)曲線,所以它也成了ELISA中應(yīng)用最廣的模型之一。
注:曲線擬合方法雖多,要根據(jù)不同類型ELISA本身的特點(diǎn),選擇最適合的曲線擬合模型,才能得到最合理的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。一般情況下,需要綜合考慮標(biāo)準(zhǔn)曲線的趨勢(shì)走向以及R2值的大小以及樣本落值情況。
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