DC 是“Dendritic Cells”的縮寫，中文全稱為“樹突狀細胞”，因其成熟時伸出許多樹突樣或偽足樣突起而得名。DC 是由2011 年諾貝爾獎獲得者、加拿大籍科學家Ralph M. Steinman 于1973 年發(fā)現(xiàn)的，是目前發(fā)現(xiàn)的功能最強的抗原遞呈細胞(Antigen Presenting Cells, APC)。已證實，DC 是唯一能夠顯著刺激初始T 細胞(Na?ve T cells)增殖的APC，而其它種類的APC(如單核巨噬細胞，B 細胞等)僅能刺激已活化的或記憶性的T 細胞，因此DC 是機體適應性T 細胞免疫應答的始動者，在腫瘤免疫中發(fā)揮著極其重要的作用。

【培養(yǎng)原理】

因為 DC 需從其它種類細胞誘導分化而來，且可分為不同的成熟階段，所以通常分為2個步驟進行培養(yǎng)：

Step 1：從DC 的祖細胞(如單核細胞)誘導分化為未成熟DC (immature DC，iDC)；

Step 2：從iDC 誘導分化為成熟DC (mature DC，mDC)。

Step 1 需要試劑：

GM-CSF 和IL-4 共同作用可使單核細胞定向分化為未成熟DC，此時的DC 具有較強的抗原攝取和加工能力，但抗原遞呈能力很弱。細胞表面中度表達MHC I 類、II 類分子和B7 家族分子(CD80, CD86 等)，但不表達或低表達CD14。

GM-CSF(粒細胞巨噬細胞集落刺激因子)：

GM-CSF 是最早被鑒定出對DC 培養(yǎng)有作用的細胞因子之一，在DC 培養(yǎng)中的功能是促進單核細胞向大巨噬樣細胞分化，細胞表面MHC II 類分子的表達得以提高，從而增強細胞的抗原遞呈功能。此外，GM-CSF 也可促進DC 的存活。

IL-4 (白細胞介素-4)

IL-4 在由單核細胞誘導成DC 的過程中發(fā)揮的作用是抑制巨噬細胞的過度生長，從而引導單核細胞向DC 方向分化。若培養(yǎng)體系中不加IL-4，單核細胞將分化為巨噬細胞。同時，IL-4 還有降低細胞表面表達CD14 分子的能力。CD14 表達水平的降低是單核細胞分化為DC 的重要標志。

Step 2?需要試劑：

TNF-a/IL-1b/ IL-6 (腫瘤壞死因子-a/白細胞介素-1b/白細胞介素-6)

TNF-a，IL-1b和IL-6 均為促炎癥因子，在感染局部和腫瘤部位被誘導產生。體外研究表明，這3 種細胞因子均可下調未成熟DC 的巨胞飲作用和表面Fc 受體的表達，使細胞內MHC II 類分子區(qū)室(class II compartment)消失，但能夠上調細胞表面MHC I 類、II 類分子和B7 家族分子(CD80, CD86 等)的表達， 使未成熟DC 分化為成熟DC，此時DC 的抗原攝取和加工能力明顯減弱，而抗原遞呈能力顯著增強，可極強地激活T細胞。TNF-a/IL-1b/IL-6 三因子組合可在無牛血清培養(yǎng)條件下誘導DC 的完全成熟，從而制備出可以應用于臨床的DC。

PGE2 (prostaglandin E2，前列腺素E2)

PGE2 也是炎性介質，可由TNF-a，IL-1 和LPS(脂多糖)等炎癥信號誘導產生。在TNF-a/IL-1b/IL-6 成熟誘導組合中添加PGE2，可進一步提高DC 的產量、成熟度、遷移能力和免疫激活能力。這里尤為重要的是DC 遷移能力的提高。因為TNF-a/IL-1b/IL-6 誘導成熟的DC 遷移能力較弱，不能很好地到達淋巴結而激活T 細胞。而添加PGE2 后誘導成熟的DC 因表面趨化因子受體的高表達，而更容易遷移至淋巴結，而引起機體對抗腫瘤的免疫反應。因此，TNF-a/IL-1b/IL-6/PGE2 組合(見下表)廣泛應用于臨床，并被認為是制備成熟DC 的“金標準”

組份?的工作濃度

TNF-a ?10ng/ml? ?IL-1b ???10ng/ml ??IL-6? ?1000 U/ml ??PGE2? 1mg/ml

【DC?培養(yǎng)試劑推薦】

注：Animal Free 意為無動物成分。無動物成分的重組細胞因子在生產過程中不會有任何動物源性物質，尤其是牛的病原體和蛋白的混入，使得最終獲得的重組人蛋白中不含任何動物成分。這樣可避免動物病原體(如瘋牛病，克雅氏病等)的污染及外源蛋白引起的機體異種排斥和過敏反應，因此細胞治療的體外細胞培養(yǎng)過程中最好使用無動物成分的重組細胞因子。

【DC?鑒定試劑推薦】

注：用于DC 鑒定的表面標志物的表達在流式圖上均呈現(xiàn)單個峰，且多數情況下不能與陰性峰完全區(qū)分開來。為避免多色分析時補償調節(jié)不好導致結果的不準確性，建議最好用單標，最多用雙標來做DC 表面標志的分析，而且必須使用同型對照，而非空白細胞對照來排除背景染色。

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