Peprotech細(xì)胞因子其他常見問題

2021-06-22

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其他常見問題

● Peprotech細(xì)胞因子的穩(wěn)定性如何？?

除特殊說明之外，Peprotech的細(xì)胞因子或重組蛋白均以凍干粉形式提供，這使得細(xì)胞因子或重組蛋白在室溫條件下便非常穩(wěn)定。盡管如此，還是建議將細(xì)胞因子或重組蛋白置于-20℃或-80℃儲(chǔ)存，可穩(wěn)定數(shù)年。

重懸后的細(xì)胞因子或重組蛋白，在4℃條件下可短期儲(chǔ)存1-2周左右的時(shí)間，具體請(qǐng)參考具體產(chǎn)品的COA。若要長期儲(chǔ)存，需使用含載體蛋白的溶液稀釋已重懸的細(xì)胞因子或蛋白，分裝后請(qǐng)置于-20℃或-80℃儲(chǔ)存。為避免蛋白部分變性，在凍存期間請(qǐng)避免重復(fù)凍融循環(huán)。

●?PeproTech細(xì)胞因子的內(nèi)毒素水平如何？?

PeproTech大部分無動(dòng)物成分級(jí)別細(xì)胞因子的內(nèi)毒素水平均保證低于0.01 ng/μg蛋白，即0.1 EU/μg蛋白。對(duì)于大多數(shù)非無動(dòng)物成分級(jí)別的細(xì)胞因子，內(nèi)毒素水平保證低于0.1 ng/μg蛋白，即1 EU/μg。事實(shí)上許多細(xì)胞因子的實(shí)際內(nèi)毒素含量均低于說明書上標(biāo)注的內(nèi)毒素水平。

●?ED50和units/mg均用來表示比活性(specific activity)，兩者之間有什么關(guān)聯(lián)？?

ED50的定義是可誘導(dǎo)50%最大反應(yīng)的細(xì)胞因子濃度，而比活性(specific activity)是單位重量蛋白樣品中所含的活性單位。比活性單位(Specific Activity Units)只能用于表示蛋白的效能，且僅適用于劑量反應(yīng)曲線為S形的蛋白。以ng/ml為單位的ED50和以units/mg為單位的比活性之間的換算公式為：
Peprotech細(xì)胞因子其他常見問題

●?比活性單位(specific activity units)和活性的國際單位(International Units)之間有什么關(guān)聯(lián)？

比活性單位和國際單位(IU)之間沒有直接的關(guān)聯(lián)，不能相互換算。

國際單位(IU)是與國際標(biāo)準(zhǔn)品的活性單位(即IU/ng)比對(duì)后得出的活性數(shù)值，后者是在世界衛(wèi)生組織(WHO)領(lǐng)導(dǎo)的國際合作研究中確定的。WHO國際標(biāo)準(zhǔn)品由英國國家生物制品檢定所(NIBSC)制備和提供。

簡(jiǎn)單地與國際標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì)而得出的蛋白活性國際單位(IU)常會(huì)出現(xiàn)偏差，原因是每個(gè)蛋白廠家所用的活性檢測(cè)方法很難一致，從而導(dǎo)致與國際標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì)后得到的國際單位(IU)值相互間不具可比性。想要實(shí)現(xiàn)真正的可比性，必須建立標(biāo)準(zhǔn)的活性檢測(cè)方法，以保證所得出的蛋白活性國際單位(IU)值僅與蛋白的質(zhì)量有關(guān)，而與蛋白的來源無關(guān)。

●?PeproTech是怎樣得到蛋白活性的國際單位(IU)值的？?

在可能的情況下，PeproTech通過將自己的產(chǎn)品與對(duì)應(yīng)的WHO標(biāo)準(zhǔn)品在自已的生物活性測(cè)試中進(jìn)行多次平行比對(duì)來得出國際單位(IU)值。多次對(duì)比可保證我們能夠排除因測(cè)試本身的不穩(wěn)定性(如產(chǎn)品批次，使用方法和測(cè)試方案等的變異性)而導(dǎo)致的異常值的出現(xiàn)。經(jīng)多次比對(duì)得出的結(jié)果可對(duì)我們產(chǎn)品的國際單位(IU)值進(jìn)行可靠的定量。

●?為什么收到Peprotech的細(xì)胞因子之后，在產(chǎn)品管中看不到任何蛋白團(tuán)塊或粉末狀產(chǎn)品？?

與市場(chǎng)上的許多蛋白產(chǎn)品不同，PeproTech的產(chǎn)品中不含任何載體蛋白和其它添加物（如BSA, HSA和蔗糖等），并且常在最低含鹽量的溶液中凍干，結(jié)果是微量的蛋白在凍干過程中會(huì)沉積在管壁上，形成蛋白薄膜，有時(shí)肉眼觀察不到。建議在打開管蓋前用小離心機(jī)快速離心20-30秒，使附著在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底。盡管可能看不到蛋白團(tuán)塊，但Peprotech的質(zhì)控程序保證每管中的蛋白含量準(zhǔn)確無誤。

●?無動(dòng)物組分（Animal Free, AF）重組蛋白和普通科研級(jí)別（RUO）重組蛋白的區(qū)別

無動(dòng)物組分（AF）的細(xì)胞因子或重組蛋白與普通科研級(jí)別（RUO）的細(xì)胞因子或重組蛋白相比在蛋白生物活性及氨基酸序列上是完全一致的，最主要的區(qū)別是在蛋白的表達(dá)細(xì)胞及表達(dá)體系上。無動(dòng)物組分的細(xì)胞因子或蛋白均為原核表達(dá)，在傳統(tǒng)表達(dá)法的基礎(chǔ)上對(duì)培養(yǎng)體系進(jìn)行了改進(jìn)，在培養(yǎng)過程中不加入蛋白胨或牛血清等動(dòng)物成分，因此最后所得到的細(xì)胞因子或蛋白是不含有任何動(dòng)物成分的。這使得其在使用過程中不會(huì)給培養(yǎng)體系引入動(dòng)物源的病毒，更適用于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，可保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性。具體信息請(qǐng)見下表：

Peprotech細(xì)胞因子其他常見問題

●?在查找Peprotech細(xì)胞因子的過程中，經(jīng)常有客戶會(huì)遇到這樣的問題，想查找Mouse的某指標(biāo)產(chǎn)品，但發(fā)現(xiàn)官網(wǎng)沒有，只能找到人的，例如客戶要找Mouse CNTF，卻只找到了Human CNTF，此時(shí)是否可以使用呢？?

對(duì)于這種情況，建議查看官網(wǎng)產(chǎn)品頁面所列出的crossreactivity，如下圖所示。在Peprotech官網(wǎng)列出的交叉種屬中，如果點(diǎn)擊交叉種屬可以轉(zhuǎn)入?yún)⒖嘉墨I(xiàn)的界面，是已經(jīng)有客戶將該產(chǎn)品應(yīng)用于該種屬發(fā)表了文章的種屬，可以將其推薦給客戶，并且可以售后，例如點(diǎn)擊Mouse，會(huì)自動(dòng)轉(zhuǎn)入?yún)⒖嘉墨I(xiàn)界面（如下圖）。但是，如果在交叉種屬下面沒有文獻(xiàn)鏈接的種屬，是指蛋白同源性高才會(huì)被列舉到交叉反應(yīng)中，要推薦給客戶的話，需要提前咨詢一下Peprotech的技術(shù)，如果廠家經(jīng)過比對(duì)或者經(jīng)過核實(shí)，確定是可以推薦給客戶的，那么這個(gè)蛋白是有售后的，否則只能建議客戶嘗試，但不保售后。

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