內(nèi)毒素污染
內(nèi)毒素，又稱脂多糖（LPS），是革蘭氏陰性細菌的主要細胞壁成份。內(nèi)毒素的來源包括培養(yǎng)基、血清、水、緩沖溶液和其他細胞培養(yǎng)試劑，如胰蛋白酶。內(nèi)毒素是體內(nèi)外炎癥反應(yīng)的有效誘導劑。內(nèi)毒素污染是細胞培養(yǎng)和生產(chǎn)注射藥物中的主要問題。溶液和試劑可能是無菌但仍含有細菌成分，因此監(jiān)測細胞培養(yǎng)試劑中是否存在內(nèi)毒素至關(guān)重要。
注意：“內(nèi)毒素”有時候用于描述細菌其他組成部分（如鞭毛蛋白），但在細菌學中它僅指脂多糖。
LPS的基本結(jié)構(gòu)
常見的內(nèi)毒素污染源？
水 — 使用高純度水制備培養(yǎng)基和溶液，清潔玻璃器皿。
玻璃器皿 — 為了消除內(nèi)毒素，必須將玻璃器皿加熱至250°C維持≥30分鐘，或加熱到180°C維持 3 小時1。
培養(yǎng)液、血清和添加劑 — 使用前要求制造商提供內(nèi)毒素水平認證或測試。
塑料容器 — 要求制造商提供內(nèi)毒素水平和無致熱源的證明。
讓 InvivoGen 保障您的安全 ！所有InvivoGen的試劑都經(jīng)過徹底測試，以確保不存在細菌污染，包括內(nèi)毒素。
我的實驗有什么風險？
內(nèi)毒素在體外和體內(nèi)實驗均可引起顯著的不穩(wěn)定性。脂質(zhì)A部分能夠激活細胞表面或內(nèi)體的Toll樣受體4（TLR4），誘導MAP激酶（MAPK）、NF-κB和IRF（干擾素調(diào)節(jié)因子）通路的激活。盡管內(nèi)毒素的作用隨濃度和細胞類型的不同而改變，但它們確實可以改變細胞形態(tài)、影響增殖和轉(zhuǎn)染效率。此外，LPS還誘導了炎性細胞因子如TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-18的產(chǎn)生，并激活caspase 4/5/11-NLRP3 非經(jīng)典炎癥小體，導致細胞焦亡。
在體內(nèi)實驗，低內(nèi)毒素濃度可刺激免疫系統(tǒng)，而高濃度可引起發(fā)燒、低血壓、多器官衰竭，甚至死亡。
內(nèi)毒素在體內(nèi)外的主要影響
1.?Gorbet MB. & Sefton MV., 2005., 2.?Leider, R. et al. 2013., 3.?Nims, RW. & Price PJ. 2017., 4.?Rathinam VAK. et al., 2019
生物試劑內(nèi)毒素檢測
HEK-Blue? LPS 檢測試劑盒 2
基于細胞的比色法分析
? 用途廣泛：適用于幾乎所有的生物試劑
? 高靈敏度：檢測限為0.01 EU/ml
? 經(jīng)濟實惠：1個試劑盒最多可進行500次測試
HEK-Blue? LPS 檢測試劑盒2的原理
試劑盒依賴于InvivoGen專有的HEK-Blue?-4細胞，該細胞穩(wěn)定表達人源TLR4和一個NF-κB誘導的分泌型胚胎堿性磷酸酶（SEAP）報告基因。
簡單的實驗程序使該試劑盒成為常規(guī)測試的理想選擇。只要樣品中含有微量的LPS，在與HEK-Blue?-4細胞孵育過夜后，會導致NF-κB的激活和SEAP報告基因的表達。培養(yǎng)上清液中的SEAP活性通過加上底物QUANTI-Blue?溶液，并使用分光光度計在620-655 nm的波長測量。吸光度與內(nèi)毒素含量成正比。使用試劑盒中提供的HEK-Blue?內(nèi)毒素標準品，經(jīng)系列稀釋獲得標準曲線從而計算內(nèi)毒素濃度（大腸桿菌055:B5 LPS的制備參照FDA批準的內(nèi)毒素工作標準品（CSE）制備標準）。HEK-Blue? LPS檢測試劑盒2 在InvivoGen公司內(nèi)部用作常規(guī)檢測。
使用該試劑盒的5大原因
1.替代昂貴而耗時的鱟試劑（LAL）。
購買此套件一次，凍存HEK-Blue?-4細胞，以后只需重新訂購其他耗材。
2.與LAL分析不同，如果樣品含有(1,3)-β-D-葡聚糖，使用HEK-Blue?-4細胞進行LPS檢測不會導致假陽性。
3.適用于所有生物樣品，包括培養(yǎng)基、血清、化學制劑和疫苗佐劑。
4.溶液顏色從粉紅色變?yōu)樽?藍色表示 陽性反應(yīng)，結(jié)果簡單可視。
5.包括一本實驗程序小冊子，計算內(nèi)毒素濃度的方法，以及疑難排解部分。
產(chǎn)品訂購
產(chǎn)品名稱?
| 產(chǎn)品說明 | 貨號 | 規(guī)格 |
| HEK-Blue? LPS Detection Kit 2 | Assay for the detection and quantification of biologically active LPS | rep-lps2 | 1 kit? |
| HEK-Blue? Selection | ntibiotics for maintenance of HEK-Blue? cells | hb-sel | 10 x 1ml |
| HEK-Blue? Endotoxin Standard | Standardized E. coli 055:B5 LPS | rep-hbes-10 | 10 x 50 EU |
| Normocin? | Reagent for preventing microbial contamination | ant-nr-1 ant-nr-2 | 500 mg (10 x 1 ml) 1 g (1 x 20 ml) |
| QUANTI-Blue? Solution | Alkaline phophatase detection medium (liquid form) | rep-qbs rep-qbs2 | 5 ml 10 ml? |
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