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●如何避免活細胞成像中的光漂白
光漂白，即光照條件下導致的熒光基團降解，其在活細胞成像中是一個非常嚴重的問題。在活細胞成像中使用高強度激發(fā)光可降低熒光基團發(fā)射熒光強度，甚至使其完全發(fā)射不出熒光。不過，這個問題是可以解決的。目前，在不影響細胞活性的前提下，科學家發(fā)現(xiàn)了幾種可以保護熒光蛋白和熒光染料所發(fā)的熒光不發(fā)生衰減并能保持熒光信號強度的方法。
●怎樣減少熒光漂白現(xiàn)象呢？
在進行活細胞成像時，可以采取以下幾種方式減少光漂白現(xiàn)象的發(fā)生。GE醫(yī)療集團，細胞分析-基因組學研究領域產品支持和應用領導者Leanna Ferrand給出了如下幾個建議：
1、使用與熒光顯微鏡的激發(fā)波長和發(fā)射波長相匹配的熒光染料和熒光蛋白進行細胞成像；
2、盡可能降低激發(fā)光的強度，減少曝光時間；
3、避免長時間將樣品暴露在“無用”的光照條件下，例如在沒有收集數(shù)據(jù)時在鏡下長時間觀察等；
4、當設計實驗時，要仔細考慮所有的實驗參數(shù)，收集足夠多的信息來回答研究的問題即可，不要浪費時間在其他因素上。你考慮的參數(shù)包括整個實驗的進行時間、實驗進行期間的拍照頻率、每次拍照使用的熒光通道數(shù)量、Z堆棧高度等；
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注意，如果研究者拍照時間越長，那么考慮上述四個參數(shù)應該越嚴格，這樣才能確保在實驗中觀察到正確的細胞活動，而不是熒光漂白或者光毒性現(xiàn)象。
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●Oxyrase公司的銷售市場經理Lisa Stewart同時也建議：
1、當進行觀察時，使用中性密度濾光片來減少過多的曝光；
2、盡量選擇對光不敏感的染料進行染色。
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●使用減少光漂白的試劑
目前，市場上有一些公司可以提供專門用于活細胞成像實驗中增強活細胞成像研究的試劑，比如Vector Laboratories公司的VectaCellTM Trolox 抗熒光淬滅劑。Vector Laboratories市場總監(jiān)Melissa Rebar博士指出，抗熒光淬滅劑通常用于固定樣品的成像。由于普通的抗熒光淬滅劑與活細胞不相容性，其不能用于活細胞的成像實驗。
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Vector Laboratories公司的VectaCellTM?Trolox 抗熒光淬滅劑是專門用于活細胞成像實驗使用的抗熒光淬滅劑，該試劑能保持熒光信號強度和時間。并可以保持熒光蛋白或細胞染料在活細胞成像中對光漂白現(xiàn)象的敏感性。
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VectaCellTM?Trolox抗淬滅試劑是一種穩(wěn)定的水溶性的維他命E的形式，該試劑抗光漂白和抗頻閃的性能是由于Trolox和其氧化形式Trolox-醌的聯(lián)合作用。這種氧化還原體系能高效對抗不同的活性氧，比如單質氧，超氧化物陰離子或者過氧化氫。Rebar博士指出，Trolox這種物質對多種細胞均具有保護作用，并呈現(xiàn)低毒性。
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因為VectaCellTM?Trolox抗淬滅劑是一種抗氧化劑，這種試劑的最佳工作濃度依賴于細胞類型以及細胞對低氧環(huán)境的耐受度。研究者在使用時需要對實驗條件進行一些優(yōu)化。
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●產品列表
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