鄰位連接分析(Proximity Ligation Assay, PLA)是近幾年建立的一種可以用于研究蛋白質(zhì)定位、相互作用、修飾以及功能的蛋白質(zhì)體外分析技術(shù)。其作用原理的基礎(chǔ)是一對(duì)標(biāo)記了寡核苷酸的抗體：依照實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)的不同，可以選擇共同辨認(rèn)目標(biāo)蛋白上不同抗原區(qū)、兩個(gè)可能相互作用的蛋白區(qū)塊，抑或是目標(biāo)蛋白的修飾添加物; 而標(biāo)記在抗體上的寡核苷酸則是選用能與之后加入的連接寡核苷酸(connector oligos)配對(duì)的序列。
以GeneTex的新產(chǎn)品SARS-CoV-2 Membrane Protein Proximity Ligation Assay (PLA) Kit (Cy3) (GTX537371-23)為例說明: 當(dāng)兩個(gè)抗體對(duì)新冠病毒膜蛋白形成雙重辨認(rèn)，且距離足夠靠近彼此時(shí)(<40nm) (上圖步驟A)，抗體上的寡核苷酸會(huì)與連接寡核苷酸配對(duì)并形成環(huán)狀單鏈DNA (步驟B與C)。此環(huán)狀單鏈DNA通過設(shè)計(jì)在寡核苷酸上的啟動(dòng)子片段以及試劑中的DNA聚合酶進(jìn)行滾環(huán)擴(kuò)增 (Rolling Circle Amplification, RCA) (步驟D)，在原位不斷地制造DNA長鏈。經(jīng)過此擴(kuò)增步驟，即便細(xì)胞感染的病毒量極低，病毒膜蛋白的訊號(hào)也能增幅千倍以上。優(yōu)異的靈敏度與專一性使得PLA技術(shù)被視為是相當(dāng)具有價(jià)值的研究與診斷工具。
GeneTex的PLA試劑除了可以應(yīng)用于新冠病毒感染組織的膜蛋白偵測(cè)之外，也適用于被感染的細(xì)胞或是膜蛋白轉(zhuǎn)染細(xì)胞。如上文所述，透過RCA擴(kuò)增后的DNA長鏈帶有多處特殊序列 (上圖中黃色片段)，能夠被Cy3熒光分子探針標(biāo)定。因此，使用者可以輕易地使用熒光顯微鏡觀察并擷取所需的視野，可說是相當(dāng)?shù)乇憷?步驟E)。
GeneTex有許多經(jīng)充分驗(yàn)證的抗體與試劑。為推動(dòng)基礎(chǔ)科學(xué)與臨床研究，近幾年來積極投入開發(fā)傳染性疾病研究領(lǐng)域的抗體、蛋白與試劑。欲了解GeneTex新冠病毒或其他研究領(lǐng)域的相關(guān)產(chǎn)品，請(qǐng)聯(lián)系我們的代理商欣博盛生物或訪問我們的網(wǎng)站www.genetex.com以獲取更多信息。
重點(diǎn)產(chǎn)品
鄰位連接分析優(yōu)勢(shì)
偵測(cè)內(nèi)源性蛋白
蛋白與蛋白作用可視化
蛋白質(zhì)翻譯后修飾可視化
高度專一性
單一分子靈敏度
SARS-CoV-2 Membrane Protein Proximity Ligation Assay (PLA) Kit (Cy3)(GTX537371-23)
利用PLA試劑檢測(cè)轉(zhuǎn)染后的HEK293T 細(xì)胞 (SARS-CoV-2 (COVID-19) Membrane FFPE 293T cell pellet Block, GTX435645)。陽性鄰位連接分析訊號(hào)以黃色熒光呈現(xiàn)，細(xì)胞核則以藍(lán)色熒光呈現(xiàn)。
圖A: 于病毒膜蛋白轉(zhuǎn)染的HEK293T細(xì)胞中測(cè)得陽性訊號(hào)
圖B: 陰性對(duì)照組: 模擬測(cè)試轉(zhuǎn)染的HEK293T細(xì)胞
圖C: 陰性對(duì)照組: 使用非專一性寡核苷酸標(biāo)定之抗體檢測(cè)病毒膜蛋白轉(zhuǎn)染的HEK293T細(xì)胞
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