免疫反應(yīng)是由固有免疫細(xì)胞與適應(yīng)性免疫細(xì)胞互相作用而形成的復(fù)雜反應(yīng)，單獨(dú)的抗體反應(yīng)或者B細(xì)胞反應(yīng)無(wú)法全面展現(xiàn)這個(gè)復(fù)雜的過(guò)程。

抗體滴度能否作為抵御SARS-CoV-2的保護(hù)性免疫指標(biāo)目前還存在爭(zhēng)議。由輔助T細(xì)胞和細(xì)胞毒性T細(xì)胞誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫在保護(hù)性免疫中起重要作用，同時(shí)，T細(xì)胞可起到免疫檢測(cè)的作用。

我們使用FluroSpot對(duì)7名COVID-19恢復(fù)期患者進(jìn)行了研究。使用FluroSpot檢測(cè)細(xì)胞因子的分泌具有很高的靈敏度，與流式細(xì)胞術(shù)相比，靈敏度可提高幾百倍。FluroSpot還可以用于直接檢測(cè)再次接受病毒多肽刺激時(shí)細(xì)胞因子的分泌情況。我們選擇分析患者的IL-2和IFN-γ兩個(gè)細(xì)胞因子來(lái)全面的評(píng)估T細(xì)胞對(duì)病毒感染的應(yīng)答?(Chauvat et al, Hum Vaccin Immunother, 2014)。同時(shí)，我們使用自制的SARS-CoV-2 ELISA試劑盒來(lái)考察患者的抗體水平，并將兩種方法的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。

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方法：

研究用血液來(lái)源于7名經(jīng)PCR確診患有輕中癥SARS-CoV-2的恢復(fù)期患者。提取患者捐獻(xiàn)血液樣本的PBMC（外周血單核細(xì)胞），分別使用SARS-COV-2 peptide pool?和T cell specific peptide pools（陰性對(duì)照）進(jìn)行刺激。在Mabtech IRISTM上使用Human IFN-γ/IL-2 FluoroSpotPLUS?kit（250,000 cells/well）分析T細(xì)胞應(yīng)答。同時(shí)，使用自制的SARS-CoV-2 ELISA試劑盒檢測(cè)SARS-CoV-2?Spike RBD?特異性抗體。

結(jié)果：

所有的COVID-19恢復(fù)期患者在經(jīng)過(guò)SARS-COV-2多肽刺激后均出現(xiàn)Th1型免疫反應(yīng)。6名患者的SARS-CoV-2特異性抗體水平高于臨界值，另一名患者（C7）的抗體水平低于臨界值但是IFN-γ/IL-2反應(yīng)性最強(qiáng)。

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結(jié)論：

在本研究中，抗體滴度與T細(xì)胞反應(yīng)似乎呈現(xiàn)出負(fù)相關(guān)。C4、C5、C7三位患者的抗體反應(yīng)最弱，但是T細(xì)胞反應(yīng)卻最強(qiáng)，即使用FluoroSpot可獲得的能夠分泌IFN-γ/IL-2的細(xì)胞數(shù)最多?；诂F(xiàn)有有限的研究我們不能得出兩者具有顯著的相關(guān)性。我們沒(méi)有獲得疾病嚴(yán)重程度相關(guān)的數(shù)據(jù)。但是這些數(shù)據(jù)提出了T細(xì)胞與B細(xì)胞在COVID-19疾病中的相互作用這一個(gè)重要課題。

Ni et al (Immunity, 2020) 發(fā)現(xiàn)中和抗體滴度與病毒特異性T細(xì)胞數(shù)呈現(xiàn)正相關(guān)，與我們的結(jié)果相反。這可能是由兩項(xiàng)研究的檢測(cè)樣本有限和疾病嚴(yán)重程度不同而造成的。然而，在這項(xiàng)研究中，一位康復(fù)期患者的抗體水平較低不能被檢測(cè)到，但是使用我們的Human IFN-γ ELISpotPLUS kit (ALP)產(chǎn)品卻能夠證實(shí)T細(xì)胞對(duì)病毒產(chǎn)生反應(yīng)。

如上所述，我們分享了一些初期的研究數(shù)據(jù)。目前，我們與Cecil Czerkinsky (INSERM, CNRS, Université de la C?te d'Azur)等合作，共同進(jìn)行類似的和更大規(guī)模的研究，以評(píng)估以上研究發(fā)現(xiàn)對(duì)COVID-19診斷和預(yù)后的價(jià)值。

我們剛剛發(fā)布了SARS-CoV-2 S1 S2 N defined peptide pool，可用于定量檢測(cè)能夠分泌SARS-CoV-2 S和N蛋白特異性細(xì)胞因子的細(xì)胞數(shù)。這個(gè)產(chǎn)品已經(jīng)使用FluoroSpot和ELISpot對(duì)經(jīng)PCR確認(rèn)為SARS-CoV-2陽(yáng)性的COVID-19恢復(fù)期患者的PBMC進(jìn)行了驗(yàn)證。我們根據(jù)Ahmed et al. (Viruses) 2020，選擇SARS-1和SARS-2共同的表位來(lái)構(gòu)建肽庫(kù)。肽庫(kù)包含了41種多肽（31種MHC-I多肽，10種MHC-II多肽，每種25 μg），是S蛋白（S1 domain和S2 domain）和N蛋白的合成多肽。

相關(guān)產(chǎn)品信息

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